三磷酸腺苷发光法在结核分枝杆菌耐药检测和菌型鉴定的应用研究

摘要

目的:
　　研究三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)发光法在临床结核分枝杆菌药敏实验和分枝杆菌的菌型鉴定中应用及临床意义。
　　方法:
　　1、从实验室分枝杆菌培养的1326例阳性标本中随机抽取菌株共418例进行培养并进行鉴定，以备实验所用。
　　2、运用ATP发光法、罗氏固体药敏检测法和Geno TypeMTBDRplus检测临床菌株利福平的耐药结果。
　　3、运用ATP发光法、罗氏固体药敏检测法和BD960全自动快速分枝杆菌培养仪检测临床菌株异烟肼的耐药结果。
　　4、运用ATP发光法、罗氏固体药敏检测法和BD960全自动快速分枝杆菌培养仪检测临床菌株对硝基苯甲酸的敏感结果。
　　结果:
　　1、在利福平耐药检测的结果中发现ATP发光法与罗氏固体药敏检测法的相符率为97％。平均检测时间为7.2±1.1d，比罗氏固体药敏检测法缩短很多，差异有统计学意义。
　　2、在异烟肼耐药检测的比较中发现，ATP发光法检测结果与罗氏固体药敏检测法和BD960全自动快速分枝杆菌培养仪的一致性分别为95.2％和93.9％，差异无统计学意义。ATP发光法的异烟肼耐药平均检测时间为6.6±2.1d，比罗氏固体药敏检测法结果报告时间明显缩短。
　　3、在分枝杆菌快速鉴定的比较中发现，罗氏固体药敏检测法的准确率为95.7％，ATP发光法的准确率为98.6％与BD960全自动快速分枝杆菌培养仪的结果相同。ATP发光法分枝杆菌鉴定检测的平均时间为6.01±1.59d，比罗氏固体药敏检测法时间明显缩短。
　　结论:
　　在临床结核分枝杆菌鉴定与药敏实验的方法中，ATP发光法具有快速简便、准确性高和价格低廉等优点，在临床实验室中有推广应用价值。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

第一章 绪论

1．1 研究背景

1．1．1 表型观察法

1．1．2 分子生物学方法

1．1．3 三磷酸腺苷发光法

1．2 研究目的、内容及技术路线

1．2．1 研究目的

1．2．2 研究内容

1．2．3 技术路线

第二章 ATP发光法在利福平耐药检测中的应用

2．1 材料

2．1．1 菌株来源

2．1．2 主要仪器

2．1．3 主要试剂及来源

2．1．4 主要溶液配制方法

2．2 方法

2．2．1 标本的收集

2．2．2 浓缩集菌抗酸染色

2．2．3 菌悬液的制备

2．2．4 罗氏固体培养法

2．2．5 罗氏分枝杆菌药物敏感性测定

2．2．6 ATP发光法药敏实验操作

2．2．7 分枝杆菌DNA的提取

2．2．8 Geno Type MTBDRplus检测操作

2．2．9 标本的保存

2．2．10 统计学方法

2．3 结果

2．3．1 标准菌株(H37Rv)的最小抑菌浓度

2．3．2 结核分枝杆菌药敏鉴定结果

2．3．3 ATP发光法与罗氏固体检测法检测时间的比较

2．4 讨论

第三章 ATP发光法在异烟肼耐药检测中的应用

3．1 材料

3．1．1 菌株来源

3．1．2 主要仪器

3．1．3 主要试剂及来源

3．1．4 主要溶液配制方法

3．2 方法

3．2．1 标本的收集

3．2．2 浓缩集菌抗酸染色

3．2．3 菌悬液的制备

3．2．4 罗氏固体培养法

3．2．5 罗氏分枝杆菌药物敏感性测定

3．2．6 BD960全自动快速分枝杆菌培养仪操作

3．2．7 ATP发光法药敏实验操作

3．2．8 标本的保存

3．2．9 统计学方法

3．3 结果

3．3．1 标准菌株(H37Rv)的最小抑菌浓度

3．3．2 结核分枝杆菌异烟肼药敏鉴定结果

3．3．3 结核分枝杆菌异烟肼药敏鉴定时间的比较

3．4 讨论

第四章 ATP发光法在分枝杆菌鉴定中的应用

4．1 材料

4．1．1 菌株来源

4．1．2 主要仪器

4．1．3 主要试剂及来源

4．1．4 主要溶液配制方法

4．2 方法

4．2．1 标本的收集

4．2．2 浓缩集菌抗酸染色

4．2．3 菌悬液的制备

4．2．4 罗氏固体培养法

4．2．5 罗氏分枝杆菌药物敏感性测定

4．2．6 BD960全自动快速分枝杆菌培养仪操作

4．2．7 ATP发光法药敏实验操作

4．2．8 分枝杆菌对硝基苯甲酸生长试验

4．2．9 标本的保存

4．2．10 统计学方法

4．3 结果

4．3．1 标准菌株(H37Rv)和堪萨斯分枝杆菌的最小抑菌浓度

3．2 三种鉴定方法的结果比较

3．3 三种鉴定方法的检测时间比较

4．4 讨论

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

致谢

参加科研情况说明

硕士在读期间完成的论文