鳄嘴花抗肝癌有效部位的筛选及机制研究

摘要

目的:研究鳄嘴花(Clinacanthus nutans，CN)提取物对荷瘤小鼠的体内抑瘤作用，筛选其活性部位，探究鳄嘴花活性部位的抗肿瘤效果及对荷瘤小鼠生命延长作用，并初步阐明其可能的作用机制。
　　方法:将马来西亚产的鳄嘴花全草，烘干，乙醇提取得到鳄嘴花粗提物，冷冻干燥得粉末。小鼠Heps肝癌细胞接种至ICR小鼠右侧腋下，建立小鼠Heps肝癌模型，随机分成对照组、阳性对照组、CN低剂量组(45 mg/kg)、CN中剂量组(90 mg/kg)、CN高剂量组(135 mg/kg)。游标卡尺测量肿瘤长径和宽径，计算肿瘤体积。每天观察小鼠体重变化，摄食量的变化。给药十一天后颈椎脱臼处死，剥离肿瘤，肝脏，脾脏，胸腺并称重。苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosinstaining，H&E)观察肿瘤组织形态。萃取法制备鳄嘴花粗提物不同的极性部位，得到石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位，正丁醇部位和水部位，冷冻干燥。首先对水部位和正丁醇部位分别进行抗肿瘤活性研究，方法同上。H&E染色观察鳄嘴花正丁醇提取物(Clinacanthus nutans n-butanolextracts，CN-N)对肿瘤组织的影响。生命延长实验观察CN-N对荷瘤小鼠生存时间的影响。TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)检测CN-N对细胞凋亡情况。WesternBlot检测增殖细胞核抗原(PCNA，proliferating cell nuclear antigen)，信号转导与转录活化因子(Signal transducer and activator of transcription，STAT3)的表达来检测CN-N对肿瘤细胞增殖的影响。Western Blot检测Caspase-3，PARP(poly ADP-ribose polymerase)的表达来检测CN-N对肿瘤细胞凋亡的影响。
　　结果:实验结果显示，与对照组相比，低剂量组(45 mg/kg)、中剂量组(90 mg/kg)、高剂量组(135 mg/kg)鳄嘴花粗提物对荷瘤小鼠的抑瘤率达分别为35.2％，62.1％，14.5％;鳄嘴花粗提物水部位低剂量组(36 mg/kg)、中剂量组(72 mg/kg)、高剂量组(108mg/kg)对荷瘤小鼠的抑瘤率达分别为19.1％，26.4％，15.6％; CN-N(3 mg/kg)组、CN-N(10 mg/kg)组对荷瘤小鼠的抑瘤率达分别为41.0％，61.7％;鳄嘴花提取物对荷瘤小鼠体重，免疫器官均无显著抑制作用;H&E染色结果显示CN-N给药组肿瘤细胞凋亡/坏死程度较模型组明显;生命延长实验结果显示对照组、环磷酰胺组、CN-N(1 mg/kg)组、CN-N(3 mg/kg)组、CN-N(10 mg/kg)组存活时间分别为19.9±5.6 d，29.9±7.2 d，21.8±7.1 d,25.4±7.2 d,30.8±10.4 d;CN-N(1 mg/kg)组、CN-N(3 mg/kg)组、CN-N(10 mg/kg)组对荷瘤小鼠生命延长率分别为9.5％，27.6％，54.8％; Western Blot结果显示与对照组相比，CN-N给药后，PCNA表达减少，p-STAT3表达减少，cleaved-caspase-3表达增加，cleaved-PARP表达增加。
　　结论:当前结果表明，鳄嘴花粗提物具有良好的体内抗肿瘤活性，以中剂量组(90 mg/kg)效果最佳，抑瘤率达62.0％，且无显著毒副作用。鳄嘴花水部位提取物抑瘤率较低，并没有显示出显著抗肿瘤效果。鳄嘴花正丁醇部位CN-N提取物显示出良好抗肿瘤效果，抑瘤率随着剂量的增加而逐渐增加;CN-N能显著提高荷瘤小鼠的生存期，生存期随着给药剂量的增加而增加。CN-N(10 mg/kg)组抑瘤率为61.7％，生命延长率为54.8％，而且对荷瘤小鼠体重和免疫器官无显著抑制作用，表明CN-N毒副作用可能较小，显示出高效低毒的效果。CN-N给药后，PCNA，p-STAT3表达减少，cleaved-caspase3，cleaved-PARP表达增加，表明CN-N可能是通过抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡达到抗肿瘤效果。CN-N的抗肿瘤具体成份和机制值得进一步的研究。