廿二碳六烯酸对肺动脉高压大鼠肺血管重构及活化T细胞核因子cl表达的影响

摘要

目的:
　　1.观察廿二碳六烯酸(DHA)对野百合碱(MCT)诱导肺动脉高压大鼠模型中的肺血管重构及活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达的影响。
　　2.通过观察DHA干预组及MCT模型组大鼠肺动脉平滑肌内NFATc1蛋白和mRNA水平上的表达变化，进一步探讨NFATc1在抑制肺动脉大鼠模型的肺血管重构的作用。
　　方法:
　　取体重（200±20）g雄性Sprague-Dawley大鼠24只，随机分为三组:空白对照组(n=7)，DHA干预组(n=7)，MCT模型组(n=10)。除空白对照组外，其余两组以MCT复制肺动脉高压模型，按照60mg/kg腹腔注射一次成模的经典方法，3周即可形成。DHA干预组自腹腔注射之日起每天灌胃DHA100mg，空白对照组和MCT模型组每天灌胃等体积生理盐水，共三周。大鼠肺小动脉形态学通过HE染色，分别采用免疫组织化学、Western blot和qRT-PCR检测大鼠肺动脉内NFATc1蛋白和mRNA的表达。
　　结果:
　　1.动物一般情况:MCT模型组大鼠在MCT腹腔注射后，体重明显低于空白对照组，且至14天起部分大鼠出现皮毛无光泽、呼吸急促和行动迟缓等表现;DHA干预组大鼠体重减轻情况相对于MCT模型组得到明显改善，差异具有统计学意义(P＜0.05)，3周后MCT模型组存活率为60％，DHA干预组的存活率为85％，空白对照组的存活率为100％，相比较于MCT模型组，DHA干预组的存活率明显升高。
　　2.DHA对野百合碱诱导肺动脉高压肺小动脉形态学影响:HE染色结果显示:空白对照组大鼠肺小动脉管腔直径较大，血管壁较薄，管壁厚薄一致;DHA干预组与MCT组比较管腔狭窄程度明显减轻，明显抑制血管平滑肌的增生;MCT组大鼠肺小动脉管腔狭窄，血管中膜平滑肌细胞明显增生，管壁明显增厚，甚至完全闭塞。
　　3.免疫组化检测DHA对大鼠肺动脉平滑肌NFATc1表达的影响:正常对照组NFATc1呈微量表达。与空白对照组相比，MCT组NFATc1蛋白阳性表达较空白对照组显著增强（P＜0.05），DHA干预组此蛋白的表达量较模型组降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　4.DHA对MCT诱导的大鼠肺动脉组织中NFATc1 mRNA和蛋白表达的影响:模型组大鼠肺组织中NFATc1的mRNA及蛋白表达量明显升高，与空白对照组比较有统计学意义（P＜0.05），DHA明显降低了肺组织NFATc1mRNA及蛋白表达量（P＜0.05)。
　　5.计量资料用用(x)±s表示。各组间数据的比较，采用单因素方差分析，两组间比较用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结论:
　　DHA对野百合碱所致的肺动脉高压的具有较好的抑制作用，其作用机制可能与其抑制NFATc1表达有关。DHA是否通过调控NFATc1表达而抑制肺动脉高压的形成有待进一步研究。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

第一节 廿二碳六烯酸(DHA)在肺血管重构中的作用

1 构建大鼠肺动脉高压动物模型

2 DHA的生物学特性及应用

3 展望

第二节 活化T细胞核因子C1在在肺动脉血管重构中的作用

1 NFATc1生物学特性

2 NFATc1与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的关系

3 展望

第二章 DHA在大鼠肺血管重构中的作用

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要仪器

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要溶液配制

2．2 方法

2．2．1 实验动物分组

2．2．2 肺动脉高压模型建立及DHA干预

2．2．3 观察并记录各实验组大鼠的一般情况及生存状况

2．2．4 病理取材

2．2．5 病理组织学观察

2．3 统计学分析

2．4 结果

2．4．1 动物一般情况

2．4．2 DHA对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压病理形态学影响

2．5 讨论

第三章 DHA对MCT诱导大鼠肺动脉平滑肌NFATc1表达的影响

3．1 材料

3．1．1 主要仪器

3．1．2 主要试剂及材料

3．1．3 主要溶液及成份

3．1．4 实验动物

3．2 方法

3．2．1 实验动物分组

3．2．2 肺动脉高压模型制作

3．2．3 病理取材

3．2．4肺组织标本蜡块制作及形态学检查

3．2．5 免疫组织化学法测定大鼠肺肺血管平滑肌细胞NFATc1表达

3．2．6 RT-PCR检测NFATc1基因表达

3．2．7 采用Western Blot方法检测肺组织NFATc1蛋白的表达量

3．2．8 统计学分析

3．3 结果

3．3．1 免疫组化检测DHA对大鼠肺动脉平滑肌NFATc1表达的影响

3．3．2 DHA对MCT诱导的大鼠肺动脉组织中NFATc1mRNA表达的影响

3．3．2 Western-blot检测DHA对MCT诱导的大鼠肺动脉组织中NFATc1蛋白表达的影响

3．4 讨论

小结

参考文献

致谢

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