镇江市地方医院环境源病原菌的鉴定及其特性分析

摘要

医院环境的污染水平、抗菌剂的耐药性都是如今医疗卫生领域备受关注的重要问题。医院的环境微生物是医院感染发生和暴发的重要来源之一，环境微生物对抗生素和消毒剂等抗菌剂的耐受性大大增加了控制医院环境污染的难度。微生物的种类及其对抗菌剂的敏感性会因不同的医院环境、医疗设施以及不同的地理区域而不同，因此，地方医院的环境微生物种类、特性与地方的卫生安全和感染的预防控制息息相关。本研究从镇江市地方医院消毒后的环境中随机采样，旨在了解地方医院环境的细菌种类、病原性特征以及对抗菌剂的敏感性，为医院进行有效的消毒灭菌和合理地选择抗生素治疗感染提供重要参考，同时为探索医院环境未知细菌的特性提供一定研究信息。主要的研究内容及结果如下:
　　1、镇江地方医院消毒后环境中的细菌分离、纯化及鉴定
　　从经消毒灭菌后的医院环境中采样并分离纯化获得了26株细菌，通过设计特定引物PCR克隆各个细菌的16S rRNA全长基因，提交到NCBI数据库进行序列比对和菌株鉴定，结果显示分离到的细菌有15株芽孢杆菌(57％)、3株葡萄球菌(12％)、6株微球菌(23％)、1株埃希氏杆菌(4％)和1株微杆菌(4％)。利用生物信息学软件Mega5.0构建系统发育树(Neighbor-Joining Tree)，对这些细菌进行初步分类。
　　2、细菌对抗生素的敏感性检测
　　选择5种常用抗生素采用微量营养肉汤稀释法(Broth MicroDilution Method)对试验细菌进行了体外抗菌药物敏感性试验。结果发现，25株细菌都对一种或一种以上的抗生素具有耐药性，其中有些菌株对三种、甚至四种抗生素都具有耐药性，共有6株细菌具有多药耐药性。实验中没有发现对氨苄青霉素有抗性的菌株，提示氨苄青霉素在治疗耐药细菌感染中的有效作用。
　　3、细菌对消毒剂的耐受性分析
　　对两种常用消毒剂进行最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验以检测分离细菌对消毒剂的敏感性，并与消毒剂产品的使用说明进行比较。采用营养肉汤稀释法分别测得各个菌株对84消毒液和碘伏的MICs和MBCs。MIC的结果显示，与标准菌株相比，8株细菌对含氯消毒剂具有耐受性，12株细菌对含碘消毒剂的MIC值高出标准菌株的10％。结合MBC的实验结果可以看出，经过消毒的医院环境仍存在的细菌有些是对消毒剂具有抗性，而有些则没有抗性。将消毒剂产品的使用说明与实验测得的MIC和MBC值进行比较发现，消毒剂产品的推荐使用浓度和实际需要浓度存在一定的差异。
　　4、细菌毒性的评估
　　利用家蚕感染模型评估了25株医院环境细菌的毒性。结果发现，15株细菌的过夜培养物注射家蚕血淋巴能够在5天内杀死全部的家蚕幼虫，其它的菌株也能够杀死一定数目的幼虫。各个菌株之间的这种致死能力相差较大，其中，14号芽孢杆菌能够在12h内杀死全部的幼虫;24号微球菌能够在1d内杀死全部幼虫。细菌定量感染家蚕实验测得14号芽孢杆菌对家蚕的半致死剂量为4×104cfu/larva，24号微球菌对家蚕的半致死剂量为1×104cfu/larva。而这两株细菌经口感染家蚕不能使家蚕致死，提示医院应预防创伤感染。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 文献综述

1．1．1 院内感染和感染控制

1．1．2 院内感染常见的微生物

1．1．3 微生物的耐药性

1．1．4 微生物对消毒剂的耐受性

1．1．5 微生物对抗生素与消毒剂的交叉抗性

1．1．6 16S rDNA分析技术在细菌鉴定中的应用

1．1．7 家蚕无脊椎动物感染模型

1．2 本研究的目的和意义

1．3 主要研究内容和技术路线

1．3．1 主要研究内容

1．3．2 技术路线

第二章 医院环境源细菌的分离、纯化及鉴定

2．1 实验材料

2．1．1 样品来源

2．1．2 菌株

2．1．3 培养基

2．1．4 试剂的配制

2．1．5 仪器设备

2．2 实验方法与步骤

2．2．1 医院环境源细菌样品的采集

2．2．2 细菌样品的分离及纯化

2．2．3 扩增细菌的16S rRNA基因对分离菌株进行分子鉴定

2．3 结果与分析

2．3．1 细菌样品的分离及纯化

2．3．2 扩增细菌的16S rDNA对分离菌株进行分子鉴定

2．4 本章小结与讨论

第三章 医院环境源细菌对抗生素耐药性的检测

3．1 实验材料

3．1．1 菌种

3．1．2 培养基

3．1．3 抗生素储存液的配制

3．1．4 仪器设备

3．2 实验方法与步骤

3．2．1 抗生素储存液和培养基配制

3．2．2 稀释抗生素的制备(MIC板制备)

3．2．3 接种物制备及菌液接种

3．2．4 孵育

3．2．5 结果判断

3．3 结果与分析

3．3．1 各个菌株对不同抗生素的敏感性及多药耐药性分析

3．4 本章小结与讨论

第四章 医院环境源细菌对常用消毒剂的耐受性分析

4．1 实验材料

4．1．1 质控菌株

4．1．2 消毒剂产品

4．1．3 主要试剂配制

4．1．4 仪器设备

4．2 实验方法与步骤

4．2．1 制备浓度梯度的消毒剂溶液

4．2．2 制备试验菌悬液

4．2．3 细菌对两种消毒剂MIC的测定

4．2．4 MIC结果判断

4．2．5 最小杀菌浓度(MBC)的测定

4．2．6 MBC结果判断

4．3 结果与分析

4．3．1 医院环境源菌株对常用消毒剂的MIC

4．3．2 医院环境源菌株对常用消毒剂的MBC

4．4 本章小结与讨论

第五章 医院环境源细菌的毒性评估

5．1 实验材料及试剂

5．1．1 实验材料

5．1．2 主要试剂配制

5．1．3 仪器设备

5．2 实验方法与步骤

5．2．1 实验动物家蚕的饲养

5．2．2 细菌创伤感染家蚕

5．2．3 定量细菌创伤感染家蚕

5．2．4 细菌经口感染家蚕

5．3 结果与分析

5．3．1 各个菌株对家蚕幼虫致死能力情况的统计

5．3．2 强致死能力细菌定量感染家蚕

5．3．3 细菌经口感染家蚕

5．4 本章小结与讨论

第六章 总结与展望

6．1 主要工作总结

6．2 展望

参考文献

致谢

在学期间发表的学术论文及参加课题

附录