外周大麻素1型受体抑制剂的筛选及减肥作用机制的研究

摘要

目的：
　　采用高脂饮食诱导的小鼠肥胖模型观察新合成的大麻素1型受体（cannabinoid1receptor，CB1R）抑制剂的减肥作用及对抑郁行为的影响，筛选出减肥效果好，中枢副作用低的外周CB1受体抑制剂。另一方面，研究其调节脂代谢的机制，为新型外周CB1受体抑制剂应用于肥胖的治疗提供新的理论基础和实验依据。
　　方法：
　　在体实验：选用高脂饮食诱导成功的肥胖小鼠，给予新化合物，并记录给药组和对照组每天小鼠体重变化情况，在给药18天后，采用高架十字迷宫实验（EPM）、强迫游泳实验（FST）、悬尾实验（TST）进行抑郁行为学的检测。测定小鼠空腹血糖和胰岛素抵抗（ITT）及葡萄糖耐受实验(GTT)。测定血清中甘油三脂、总胆固醇、HDL、LDL及LDH、ALT、AST等生化指标。称量小鼠生殖器周围脂肪组织及肝脏。采用HE染色，观察各组小鼠脂肪细胞及肝细胞的形态。
　　离体实验：
　　采用PA-Na(0.5 mM)处理HepG-2细胞24h造成脂肪肝的细胞模型，再加入不同浓度（3、10、30μM）的ZH-101-S处理细胞24小时。采用MTT法检测细胞的活性，试剂盒检测甘油三脂(TG)、总胆固醇(CHOL)代谢指标水平。线粒体数量采用MitoTrackerRed染色法检测，荧光素酶法检测细胞中ATP含量，H2DCF-DA荧光探针法检测细胞中ROS的含量，Western blotting法检测线粒体膜上CB1受体的表达及p-AMPK、PGC-1α表达水平。
　　结果：
　　在体实验：持续给予CB1受体抑制剂ZH-101-S30mg/kg的小鼠体重较高脂对照组下降趋势明显。EPM、FST、TST等行为学模型结果显示，与利莫那班组相比，外周CB1受体抑制剂ZH-101-S可增加小鼠在EPM中进入开放臂的频率、时间和运动距离，降低了小鼠在FST、TST中的不动时间。ZH-101-S与利莫那班一样，具有改善高脂小鼠胰岛素抵抗及葡萄糖耐受的情况。并可降低小鼠血清CHOL、TG、Glu、LDL、AST、ALT、LDH水平，升高HDL-C，减小脂肪细胞的直径，改善肝脏组织的形态，改善脂质代谢及肝损伤。
　　离体实验：
　　MTT结果表明0.5 mM PA-Na及3、10、30μM ZH-101-S对HepG-2细胞基本无损伤。油红染色结果显示，与PA-Na处理组相比，30μM ZH-101-S处理使细胞内脂滴的含量显著减少了30.0％。与PA-Na处理组相比，30μM ZH-101-S处理使细胞内CHOL降低了30.0%，TG水平降低了63.6%，且TG水平呈浓度依赖性降低。Western blot结果显示，肝细胞线粒体膜上存在CB1受体的表达，并且ZH-101-S可促进P-AMPK、PGC-1α的表达。与PA-Na处理组相比，ZH-101-S处理可使线粒体数目增加、ATP合成增加及ROS含量减少，线粒体功能改善。
　　结论：
　　ZH-101-S给药可显著减轻肥胖小鼠体重，改善脂代谢，在保持利莫那班减肥效应的同时避免了其致抑郁样的副作用。其减肥及改善脂代谢的作用机制可能与ZH-101-S作用于线粒体外膜上的CB1受体，促进线粒体功能，增强能量代谢有关。