外周血及胸腔积液中肿瘤细胞的检测在非小细胞肺癌患者中的临床意义

摘要

目的：
　　肺癌的发病率和死亡率在中国乃至全世界都居首位。目前对肺癌患者的诊断主要依靠影像学及组织病理学，但仍受到诸多限制。随着检测方法的不断完善，循环肿瘤细胞（circulating tumor cell, CTC）作为一项新的肿瘤标志物，其特异性及敏感性都得到了不断提高。本研究通过富集纯化系统、特异性小分子探针以及荧光定量PCR系统对CTC进行检测，评价外周血及胸腔积液中肿瘤细胞计数对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床应用价值。
　　方法：
　　1.病例及样本：收集2013年1月～2014年6月无锡市第二人民医院诊断的73例NSCLC患者（其中50例合并胸腔积液）作为研究对象，同时收集良性肺部疾病患者35例。
　　2.外周血CTC检测：采集上述各研究组静脉血标本对CTC进行检测。应用CTC富集纯化系统裂解样品中的红细胞并通过免疫磁珠筛选去除白细胞。然后将富集到的CTC用肿瘤特异性叶酸配体—寡聚核苷酸复合物标记，洗涤去除未结合的复合物，并将与CTC结合的复合物特异性地洗脱下来进行定量PCR检测。
　　3.外周血CTC与临床特征的关系：分析73例初诊NSCLC患者术前CTC水平与NSCLC患者年龄、性别及临床病理参数之间的关系。利用电化学发光法检测血清中CEA与CYFRA21-1的水平，并分析外周血CTC与血清CEA， CYFRA21-1水平的相关性。
　　4. CTC在手术效果中的评价：术后第9天再次采集NSCLC患者外周血并检测CTC的含量，通过比较手术前后不同时期CTC水平的变化，判断CTC在手术效果评价中的意义。
　　5. CTC对NSCLC患者的预后评估：利用Kaplan-Meier法评价术前不同外周血CTC水平对NSCLC患者的预后评估价值。
　　6.胸腔积液中肿瘤细胞水平分析：对50例NSCLC合并胸腔积液患者胸腔积液中的肿瘤细胞进行检测，比较肿瘤细胞在胸腔积液和外周血之间的差异性表达。用全自动电化学发光分析仪检测胸腔积液中CEA的水平并分析其与胸腔积液肿瘤细胞水平的相关性。比较胸腔积液中肿瘤细胞检测与常规脱落细胞学检查之间的关系。
　　结果：
　　1. NSCLC患者外周血CTC计数显著高于良性肺部疾病对照组(p＜0.01)。
　　2. CTC水平随着TNM分期递进而增加(p＜0.01)，随着肿瘤病理分化程度升高而降低(p＜0.01)，随着肿瘤大小增加而增加(p＜0.01)，而与患者年龄、性别以及肿瘤组织类型无明显关系(p＞0.05)；NSCLC患者外周血术前CTC与CEA水平呈正相关（r=0.543，p＜0.01），与CYFRA21-1水平无相关性（r=-0.067, p＞0.05）。
　　3.初诊NSCLC患者组术后第9天的外周血CTC水平显著低于术前，差异具有统计学意义(t=6.654, p＜0.01)。
　　4. Kaplan-Meier结果显示，CTC≥16.5 CU时与NSCLC死亡率相关（χ2=51.21， p＜0.01）。
　　5. NSCLC患者胸腔积液中肿瘤细胞显著高于外周血中循环肿瘤细胞水平，且患者胸腔积液中肿瘤细胞数值与外周血中循环肿瘤细胞水平相关系数为0.882(p＜0.0001)，呈显著正相关。胸腔积液中肿瘤细胞水平和CEA水平呈显著正相关（r=0.677，p＜0.01）。胸腔积液脱落细胞病理学检查阳性组肿瘤细胞水平显著高于阴性组（p＜0.01）。
　　结论：
　　NSCLC患者外周血中CTC及胸腔积液中肿瘤细胞表达明显升高，并且与患者肿瘤发展、转移及不良预后密切相关，是NSCLC治疗监测和预后的有益标志物。

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中文摘要

英文摘要

目录

第一章 前言

第二章 本论文的研究目的、技术路线

一、 研究目的

二、 技术路线

第三章 本论文的实验方法、结果及讨论

第一部分 NSCLC患者外周血CTC的检测及其临床意义

1 研究对象

2 材料与方法

3统计学分析

4 结 果

5 讨论

第二部分 NSCLC患者胸腔积液中肿瘤细胞的检测及初步临床意义的探讨

1 研究对象

2 材料与方法

3统计学分析

4 结果

5 讨论

主要结论

参考文献

综述:外周血循环肿瘤细胞的检测及其在肺癌中的研究进展

英文缩写索引

致谢

攻读硕士学位期间发表论文及学术交流