人参炔醇抑制胰腺癌干细胞的增殖及自我更新

摘要

实验目的：
　　通过各种方法及相关蛋白的测定，探讨人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖及自我更新的影响。
　　实验方法：
　　（1）胰腺癌干细胞培养：胰腺癌Panc-1细胞在加有EGF、bFGF及B27的干细胞培养体系培养基中培养，参照试剂说明及其他文献培养成胰腺癌干细胞，细胞的CD133+用流式细胞仪进行检测，观察培养后细胞的干性比例；
　　（2）胰腺癌干细胞分选：为了得到更高比例的胰腺癌干细胞，通过流式细胞仪将培养的细胞进行CD133+分选。
　　（3）CCK8实验：将人参炔醇分为0、72、144、287nmol/L四个药物浓度分别作用于胰腺癌干细胞，作用时间为0、12、24、48h，CCK8实验选出合适的药物作用浓度及最佳的作用时间；
　　（4）克隆实验：浓度为0、72、144、287nmol/L的人参炔醇作用于胰腺癌干细胞48h后，将干细胞消化为单个细胞，并重新种于6孔板中培养两周，形成集落后，对实验组与对照组集落的数目进行比较；
　　（5）western blot实验：检测增殖相关蛋白Ki67、PCNA及自我更新有关蛋白β-catenin。
　　实验结果：
　　（1）经干细胞培养体系培养的胰腺癌干细胞，用流式细胞仪检测其CD133+比例为9.96％，对照组干性比例为2.21%，两组相比具显著统计学意义（P<0.001）；
　　（2）经过细胞分选后，胰腺癌干细胞比例为96.78%，对照组为3.67%，两组相比具有显著统计学意义（P<0.001）；
　　（3）CCK8实验OD值检测显示，人参炔醇减少胰腺癌干细胞的存活率，药物作用具有浓度依赖性，并随着时间延长作用加强，0、72、144、287nmol/L的人参炔醇作用胰腺癌干细胞48h后存活率分别为100%、63.13%、50.32%、41.62%，结果具有显著统计学意义（P<0.001）；
　　（4）克隆实验中，数量上实验组的集落少于对照组（P<0.001）；
　　（5）人参炔醇作用48h后，胰腺癌干细胞的Ki67、PCNA及β-catenin蛋白表达量均降低。
　　结论：
　　（1）人参炔醇作用于胰腺癌干细胞，抑制其增殖及自我更新能力；
　　（2）其机制可能与下调Ki67、PCNA表达，阻滞Wnt/β-catenin信号通路有关。