骨髓瘤细胞株H929的SOX2蛋白及趋化相关基因CCR1、CCR2、MCP-1等转录受白介素-1β预处理的骨髓间充质干细胞影响

摘要

目的：观察白介素（interleukin，IL）-1β单次或多次预处理人BMMSCs后，对BMMSCs的BMP-2表达的影响；以及不同方案预处理的BMMSCs与MM细胞株共培养后，观察其对骨髓瘤细胞的干细胞相关蛋白、趋化细胞因子及其相关受体等表达的影响。
　　方法：1、实验分三组：A组：为无IL-1β预处理的BMMSCs对照组、B组：为IL-1β预刺激1天、C组：IL-1β每天预刺激1次，共连续处理7天。三组分别加入骨髓瘤细胞株H929直接接触共培养，3天后收集各组中H929细胞。观察各组细胞形态及生长状况。
　　2、采用细胞免疫组织化学染色法检测各组BMMSCs的BMP-2的表达，同时加用NF-kB的抑制剂（Pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC），研究NF-kB通路在BMMSCs的BMP-2表达的影响。
　　3、采用 Western blot方法检测各组H929细胞 NANOG、SOX2和OCT-4蛋白的表达水平。
　　4、采用RT-PCR方法检测各组H929细胞因子CCR1、CCR2、CCR6、CXCR4、MCP-1、MIP-1α和DKK1的表达水平。
　　结果：1、倒置显微镜观察示：各组BMMSCs均能在体外贴壁生长。经 IL-1β预处理1 d和7 d后的BMMSCs，其形态与对照组均无明显区别，均呈梭形。H929细胞呈悬浮生长，部分细胞可聚集成串珠样葡萄状。单独培养与共培养的BMMSCs、H929细胞，形态上无明显差别。
　　2、细胞免疫组化结果显示：与组A组比较，B组、C组BMMSCs的BMP-2表达增高；用NF-kB的抑制剂PDTC预处理后，实验组B、C两组BMP-2表达水平明显降低。
　　3、Western blot结果显示：与A组比较，H929细胞株和B组、C组共培养后，SOX2蛋白表达水平升高，且B组、C组SOX2蛋白表达水平的相对灰度值与A组间存在统计学差异（P<0.05；n=5）。A、B、C三组间NANOG、OCT-4蛋白的表达均无统计学差异。
　　4、RT-PCR结果显示：与A组、B组比较，H929细胞株和C组共培养后， CCR1、CCR2、MCP-1、MIP-1α基因的相对表达水平均增高，且其存在统计学差异（P<0.05；n=6）。但三组间CCR6、CXCR4、DKK1基因的相对表达量无统计学差异。
　　结论：我们的体外实验结果显示，IL-1β单次或多次刺激正常骨髓 BMMSCs后，可增加BMMSCs的BMP-2表达，并且BMP-2表达的上调能被NF-kB的抑制剂PDTC抑制；预处理的BMMSCs在与骨髓瘤细胞的相互作用中，对骨髓瘤细胞的干细胞基因表达，细胞因子及其受体表达等均产生影响。这提示骨髓微环境中异常水平炎性因子，除了可直接作用于骨髓瘤细胞外，还可以通过调节BMMSCs的功能，在BMMSCs与骨髓瘤细胞相互作用后，间接参与骨髓瘤疾病的发生和发展；IL-1β其对骨髓瘤细胞的间接影响效果，与IL-1β作用BMMSCs的时间长短有关。

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英文缩写索引

第一章 引 言

第二章 实验材料、方法和设计

2.1 实验材料

2.2 溶液的配制

2.3 实验方法

2.4 统计学处理

2.5 实验设计方案

第三章 实 验 结 果

3.1 BMMSCs及H929细胞形态学观察

3.2 细胞免疫组化结果

3.3 Western blot结果—与预刺激的BMMSCs共培养后H929细胞NANOG、SOX2 和 OCT-4蛋白的表达

3.4 RT-PCR检测结果—与预刺激的BMMSCs共培养后H929细胞趋化因子及趋化因子相关受体的表达

第四章 讨 论

第五章 结 论

参考文献

致谢

综述:趋化因子及其相关受体在多发性骨髓瘤中的作用

在读学位期间发表的论文