外周血中性粒细胞膜碱性磷酸酶的检测在再生障碍性贫血中的价值研究

摘要

目的：
　　本研究应用流式细胞术检测再生障碍性贫血(Aplastic anemia，AA)患者外周血中性粒细胞膜碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase expression on the membrane of neutrophils，mNAP)的表达，探讨其在AA诊断中的价值及mNAP升高的潜在机制。
　　方法：
　　1.收集2014年8月至2015年12月连云港市第一人民医院收治初诊全血细胞减少患者198例，所有入选患者的血常规均符合：Hb<100g/L、RBC<3.5×1012/L、WBC<4.0×109/L、PLT<100×109/L。经临床症状体征、实验室检查、骨髓细胞学检查及病理诊断确诊为AA患者52例，非AA导致全血细胞减少患者146例作为疾病对照组。健康对照组100例来自健康体检者。采集所选标本乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血2ml，流式检测中性粒细胞mNAP,结果以每个细胞结合的抗体数(antibodies bound per cell，AB/c)表示。比较组间差异。
　　2.用流式检测AA组外周血mNAP表达水平，采用受试者工作特征(Receiver operating characteristic，ROC)曲线评价mNAP对AA的诊断价值。
　　3. ELISA法检测各组别血清中粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）浓度，比较并分析各组间差异。
　　4.体外分离中性粒细胞，并与G-CSF共培养，流式细胞术检测中性粒细胞膜NAP的表达，观察G-CSF对NAP表达的诱导作用。
　　5.统计学处理采用SPSS17.0软件，正态分布计量数据采用(_χ± s)表示，组间比较采用方差分析，偏态分布数据以M(P25～P75)表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。ROC曲线评价mNAP对AA的诊断效能。以P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.AA、非AA疾病对照组和健康对照组mNAP检测结果M(P25～P75)分别为13931(11128–21605) AB/c、1875(1119–3119)AB/c、1831(1371–2411)AB/c，三组患者 mNAP表达差异有统计学意义(P<0.01)。AA组mNAP表达显著高于非AA组及健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。非AA疾病对照组与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
　　2.ROC曲线分析结果表明，mNAP诊断AA的ROC曲线下面积为0.95，在最佳切点6388 AB/c时，mNAP诊断敏感性为90.90％(95%CI0.83-0.96)、特异性为96.10%(95%CI0.86-0.99)，拟然比23.2。阳性预测值（PPV）88.7%、阴性预测值（NPV）99.5%。
　　3.AA组、疾病对照组和健康对照组血清G-CSF浓度（_χ± s）为467.74±186.10 pg/ml、110.23±86.00 pg/ml、63.65±38.71 pg/ml，AA组高于疾病对照组和健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；疾病对照组与健康对照组比较，差异无统计学意义。
　　4.用G-CSF培养体外分离出的中性粒细胞24小时后，流式检测中性粒细胞膜上NAP的表达。实验组即经过G-CSF培养后，mNAP值9200.00±1276.71 AB/c，对照组即未加G-CSF，mNAP值2106.67±280.06 AB/c，P<0.01，差异有统计学意义。
　　结论：
　　1.mNAP在AA患者中具有较高的特异性和敏感性，对AA辅助诊断具有重要的价值，有望成为诊断AA的辅助诊断生物标志物而广泛应用于临床。
　　2.G-CSF在AA患者中水平高于疾病对照组和健康组，差异有统计学意义。
　　3.G-CSF在体外可诱导中性粒细胞mNAP的表达，G-CSF与mNAP在AA中的高表达有一定关系。

目录

声明

注释表

第一章 绪 论

1.1 全血细胞减少(Pancytopenia, PCP)

1.2 再生障碍性贫血(Aplastic anemia, AA)

1.3 中性粒细胞碱性磷酸酶(Neutrophil alkaline phosphatase, NAP)

1.4 粒细胞集落刺激因子（Granulocyte colony-stimulating factor， G-CSF）

第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义

2.1 研究目的

2.2 研究方法

2.3 实验设计方案

2.4 研究意义

第三章 再生障碍性贫血患者mNAP的表达及临床意义

3.1 研究对象与材料

3.2 检测方法

3.3 结果

3.4 讨论

第四章 再生障碍性贫血患者mNAP升高的潜在机制

4.1 实验对象与材料

4.2 实验方法

4.3 结果

4.4 讨论

结论与展望

一、结论

二、展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表论文