肺癌患者血浆miRNA-20a和miRNA-210表达的诊断意义

摘要

目的：
　　本研究通过检测肺癌患者和肺良性疾病患者血浆miRNA-20a和miRNA-210的表达水平，探讨这两个血浆miRNAs对肺癌的诊断意义。
　　方法：
　　1、研究对象：选择58例临床上未接受任何治疗的确诊肺癌患者和46例良性肺疾病患者作为研究对象。
　　2、引物设计与合成：miRNA-20a、miRNA-210及内参U6基因的引物设计与合成由锐博生物公司提供。
　　3、研究方法：采集研究对象的外周血标本，分离血浆，提取血浆总RNA，逆转录合成cDNA，荧光定量PCR反应测定血浆miRNA-20a和miRNA-210的Ct值，应用公式：目的基因Ct值-内参基因Ct值=△Ct值，采用2-△△Ct的分析方法计算所测血浆中miRNA-20a和miRNA-210的表达水平。
　　4、统计学分析：使用SPSS19.0统计软件分析实验数据。两组间比较用Wilcoxon秩和检验，P<0.05表示差异有统计学意义。根据血浆miRNA-20a和miRNA-210检测结果构建受试者工作特征（ROC）曲线图，获得诊断肺癌的ROC曲线下面积（AUC），并确定诊断肺癌的最佳临界值，计算诊断肺癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确性。
　　结果：
　　1、肺癌患者血浆中miRNA-20a和miRNA-210的表达水平均明显高于良性肺疾病对照组（P<0.05）。
　　2、血浆miRNA-20a的表达水平与患者的临床病理特征未见相关性，而血浆miR-NA-210表达与肺癌的组织学类型、分化程度及临床分期显著相关(P=0.008、P=0.041和P=0.016）。
　　3、血浆miRNA-20a和miRNA-210的ROC曲线下面积AUC分别为0.883（95%可信区间0.821～0.946）和0.824（95%可信区间0.745～0.904），高于血清癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白19（Cyfra21-1）的0.656（95%可信区间0.551～0.761）和0.754（95%可信区间0.658～0.847）。
　　4、血浆miRNA-20a和miRNA-210诊断肺癌的敏感性(77.6%和75.9%)和准确性(81.7%和77.9%)高于血清CEA(44.8%和62.5%)和Cyfra21-1(56.9%和72.1%)，联合检测这两个血浆miRNAs能进一步提高诊断肺癌的敏感性，但特异性略有下降。
　　5、这两个血浆miRNAs联合血清CEA或Cyfra21-1可进一步提高对肺癌的诊断效果。
　　6、采用诊断试验的一致性检验来比较四种肿瘤标志物显示miRNA-20a和miRN-A-210的kappa值（分别是42.763和32.534，均p＜0.001）明显高于CEA（10.383，p=0.001）和Cyfra21-1（26.005，p＜0.001）。
　　结论：
　　1、血浆miRNA-20a和miRNA-210有可能作为诊断肺癌很有前途的生物标志物。
　　2、对于肺癌的诊断，血浆miRNA-20a和miRNA-210的诊断效果优于血清CEA和Cyfra21-1。

目录

第一章 绪 论

1 研究背景

2 研究目的、内容、方法、实验方案的设计和意义

2.1 研究目的

2.2 研究的主要内容和方法

2.3 实验流程

2.4 研究的意义

第二章 miRNA-20a和miRNA-210在肺癌血浆中的表达及诊断价值

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.2 主要仪器和试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 总RNA浓度、纯度的分析

2.2 实时荧光定量PCR扩增基因曲线图

2.3 肺癌与良性肺疾病患者血浆中miRNA-20a和miRNA-210的表达水平

2.4 肺癌患者血浆miRNA-20a和miRNA-210水平与临床病理学特征的关系

2.5 血浆miRNA-20a、miRNA-210和血清CEA、Cyfra21-1对肺癌的诊断效果比较

3 讨论

结论和展望

参考文献

综述: MiRNA在肺癌诊断与治疗中的研究进展

英文缩写索引

致谢

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