糖皮质激素多残留免疫研究与量子点在免疫分析中的应用

摘要

近年来，动物源食品中的兽药残留成为世界关注的焦点。兽药的蓄积残留对人类健康及环境均造成极大的威胁。免疫方法是快速、简便、有效的检测兽药残留的方法，多残留的群选性及与新型纳米材料的结合提高灵敏度已成为免疫方法研究的趋势。本研究包括糖皮质激素多残留的免疫方法研究及量子点这种新型纳米材料在免疫检测应用的研究这两部分。
　　 糖皮质激素多残留免疫检测方法:本文首先对地塞米松、倍他米松、双氟米松琥珀酸酐化，然后分别与牛血清白蛋白、卵清蛋白偶联，制备三种免疫原和包被原，将得到的三种免疫原各免疫2只新西兰大白兔制备抗血清，其中较好的抗血清效价分别高达345600、614400、307200，然后以效价较高的抗血清为基础设计了间接竞争ELISA方法，并优化了二抗稀释比、竞争时间、PBS溶液的pH值等条件参数。优化后的地塞米松、倍他米松、双氟米松三种抗体的间接竞争ELISA曲线的IC50分别为2.66 ng/mL、7.36 ng/mL、6.12 ng/mL。通过三种抗体的交叉反应来评估其群选特性，结果表明地塞米松抗体的群选性最强，对双氟米松的交叉反应率高达120%，倍他米松73%、曲安息龙37%、泼尼松龙21%，而对几种内源性类糖皮质激素交叉反应率均小于0.1%，然后本研究以0.375、0.75、1.5、3 ng/mL四个浓度分别添加到鸡肉样本中测定添加回收率，所得回收率范围在61%-80%之间，变异系数小于15%。在实际样本检测中，将ELISA方法的测定结果与LC-MS的结果进行比较，二者具有很好的相关性。
　　 量子点在免疫分析中的应用:本研究先用生物素化的变性BSA包裹五种不同粒径的量子点并对其光学性质进行了研究，然后用亲和素作为桥，使它们分别与五种生物素化的抗体(地塞米松、醋酸甲羟孕酮、氯硝西泮、头孢噻呋、庆大霉素)交联，得到量子点-抗体的荧光标记物，标记物被用于荧光免疫检测方法的建立，通过优化条件，本实验建立了一种简便，快速，灵敏的荧光免疫检测方法。地塞米松、庆大霉素、氯硝西泮、醋酸甲羟孕酮、头孢噻呋五种抗体的检测限可以分别达到:0.32 ng/mL、0.20 ng/mL、0.11 ng/mL、0.14 ng/mL、0.24 ng/mL。该研究实现了以量子点为探针的多残留的荧光检测。

目录

文摘

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声明

第一章 绪论

1.1 糖皮质激素概论

1.1.1 糖皮质激素的理化性质

1.1.2 糖皮质激素的残留与危害

1.1.3 糖皮质激素残留的分析检测技术

1.2 量子点概述

1.2.1 量子点的基本特性

1.2.2 量子点的制各研究进展

1.2.3 量子点与生物分子的结合的方法

1.2.4 量子点在生物体系中的应用

1.3 本课题研究内容、目标

1.3.1 研究内容

1.3.2 研究目标

第二章 糖皮质激素类ELISA方法的建立与群选性抗体的筛选

2.1 材料

2.1.1 药品与试剂

2.1.2 仪器与设备

2.1.3 溶液系统

2.2 实验方法

2.2.1 糖皮质激素免疫原的合成与鉴定

2.2.2 抗糖皮质激素抗体的制备、纯化与鉴定

2.2.3 ELISA方法的建立及群选性抗体的筛选

2.3 结果与分析

2.3.1 糖皮质激素免疫原的鉴定

2.3.2 糖皮质激素抗体效价的测定

2.3.3 ELISA方法的建立与群选性抗体的筛选

2.4 讨论

2.4.1 糖皮质激素类免疫原的合成与鉴定

2.4.2 抗糖皮质激素累抗体的制备、纯化与鉴定

2.4.3 ELISA方法的建立及群选性抗体的筛选

2.5 本章小结

第三章 量子点与抗体的偶联及其在免疫检测中的应用

3.1 材料

3.1.1 主要试剂

3.1.2 主要仪器设备

3.1.3 溶液系统

3.2 实验方法

3.2.1 偶联物的合成与鉴定

3.2.2 荧光性质

3.2.3 荧光免疫吸附法方法的建立

3.3. 结果

3.3.1 生物素化变性BSA包裹量子点

3.3.2 荧光性质

3.3.3 生物素化的抗体

3.3.4 FLISA条件的优化

3.3.5 五种药物的荧光免疫吸附法

3.4 讨论

3.4.1 量子点的光学特性

3.4.2 变性BSA包裹量子点

3.4.3 灵敏度

3.5 本章小结

第四章 结论

致谢

参考文献

附录 作者在攻读硕士学位期间发表的论文和专利

发表论文一

发表论文二