荧光定量PCR及其改良方法检测丙型肝炎病毒的比较研究

摘要

该文首先对达安基因诊断中心的试剂盒各项性能进行评价.采用HCVFQ-PCR试剂盒与传统逆转录-巢式PCR同步检测76份HCV抗体阳性血清.针对FQ-PCR的局限性,该文建立了改良FQ-PCR方法,在保留其先进性的同时,采用普通PCR扩增仪、荧光分光光度仪代替昂贵仪器进行定量.FQ-PCR特异性、敏感性与巢式PCR一致,准确性理想,易于标准化,解决了准确性和标准化两大难题.达安基因诊断中心的HCVRNA定量试剂盒检测范围宽、准确度高、基本符合设计要求.改良FQ-PCR可行性高,与FQ-PCR特异性、敏感性一致,定量结果接近,准确性较好,能够满足临床需要.与原FQ-PCR相比,改良FQ-PCR定量范围较窄,但基本可满足临床要求.

目录

一、引言

二、材料与方法

2.1 标本来源、主要仪器及试剂

2.2 RNA提取

2.3 逆转录巢式PCR

2.4 FQ-PCR定量检测

2.5 FQ-PCR准确性检验

2.6 改良FQ-PCR定量检测

三、结果

3.1 FQ-PCR标准曲线

3.2 FQ-PCR与巢式PCR定性结果比较

3.3 FQ-PCR检测 HCV RNA定量结果分布

3.4 FQ-PCR准确性的验证

3.5 改良FQ-PCR定量检测

3.6 改良FQ-PCR与FQ-PCR检测结果比较

四、讨论

4.1 HCV RNA定量方法现状

4.2 FQ-PCR方法评价

4.3 改良FQ-PCR评价

五、结论

致谢

参考文献