靶向于白细胞介素15受体的融合毒素研究

摘要

目的:一些恶性肿瘤如成人T淋巴细胞性白血病和骨髓瘤细胞表面含有丰富的白介素15受体(IL-15R),炎症性自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、克隆氏病等也都发现活化的IL-15R阳性T淋巴细胞的浸润和聚集.IL-15及IL-15R阳性细胞在这些疾病的病理过程中起着重要作用.本项目应用基因重组技术,以人白介素15(hIL-15)或受体拮抗型人白介素15突变体(hIL-15M)为载体,绿脓杆菌外毒素突变体PE△293为弹头,构建、表达两种融合毒素,为研制可特异性消除IL-15R高表达细胞的导向药物奠定基础.方法:通过PCR对绿脓杆菌外毒素进行人工改造,获得一种新的绿脓杆菌外毒素突变体,PE△293.将hIL-15成熟肽基因、hIL-15M基因片段分别与PE△293基因按正确的阅读框架融合,定向克隆于pET16b表达载体,得到重组表达质粒pET-hIL-15-PE△293和pET-hIL-15M-PE△293.将这两种重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导表达,变性条件下通过Ni<'2+>-NTA亲和层析纯化出两种融合蛋白,即hIL-15-PE△293和hIL-15M-PE△293.复性后MTT法测定两种融合蛋白对IL-15R阳性人红白血病细胞K562和其阿霉素耐药株K562/AO<,2>以及IL-15R阴性的急性T细胞白血病细胞株Jurkat的细胞毒作用.结果:经酶切分析和DNA序列分析,所构建的两个重组质粒均正确插入了各自的融合基因.SDS-PAGE分析表明,两种重组菌株诱导后分别表达与融合蛋白预计分子量相吻合的特异性蛋白带.在变性条件下从大肠杆菌中纯化出两种融合蛋白,复性后两种融合蛋白对IL-15R阳性细胞株K562和K562/AO<,2>具有明显的杀伤活性,但是对IL-15R阴性细胞株Jurkat没有表现明显的杀伤作用.结论:(1)融合蛋白hIL-15-PE△293和hIL-15M-PE△293对K562和K562/AO<,2>具有良好的杀伤活性,而对IL-15R阴性细胞株Jurkat没有表现明显的杀伤作用,说明两种融合蛋白均可以靶向杀伤高表达hIL-15R的细胞,对活化T细胞介导的炎症性自身免疫性疾病或高表达IL-15R的恶性肿瘤具有潜在的治疗价值.(2)对阿霉素耐药株K562/AO<,2>具有明显的靶向杀伤活性说明融合蛋白对耐药性肿瘤也具有潜在的治疗价值.

目录

文摘

英文文摘

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前言

文献综述 基于绿脓杆菌外毒素的导向药物研究进展

第一章材料与方法

第二章实验结果（1）

第二章实验结果（2）

第三章讨论

第四章结论

致谢

参考文献

作者简介