人精子蛋白17的原核表达及单克隆抗体制备

摘要

精子蛋白17(spermprotein17，Sp17)是一种高度保守的睾丸特异性蛋白，参与精子的顶体反应，促进受精过程。人体其他正常组织和细胞极少表达Sp17。近年来发现该蛋白基因在一些恶性肿瘤组织中被激活并高水平表达。Sp17在正常组织中局限表达和在恶性肿瘤组织中异常表达，使其在肿瘤诊断中具有潜在价值，有望作为肿瘤诊断的辅助标志，尤其是对于女性肿瘤患者。为此，我们在mRNA水平初步检测Sp17在卵巢癌组织中表达，对人Sp17基因进行了克隆和原核表达，制备了抗Sp17单克隆抗体，并通过免疫组化法检测Sp17在卵巢原发上皮性癌和子宫内膜癌组织中表达情况，结果如下： 1.RT-PCR检测表明：13例原发卵巢癌组织中，11例表达Sp17mRNA，阳性率为84.6％，呈高水平表达；3例卵巢癌病人腹水，1例检出Sp17mRNA；13例其它肿瘤组织则阴性。 2.Sp17基因的克隆和原核表达。用RT-PCR法从人睾丸中扩增Sp17cDNA，并经过DNA测序证实。构建重组表达质粒pET-28a(+)/Sp17，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，Ni-NTAHis-Bind树脂纯化重组蛋白，并用飞行质谱仪检测分析其氨基酸序列。 3.Sp17特异性单克隆抗体制备。用重组hSp17免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术获得2个持续分泌抗体的杂交瘤细胞株(3C12和3D6)。ELISA测定腹水抗体滴度约为1∶105。2株mAb均能与睾丸组织或成熟精子中天然Sp17发生特异性结合反应。 4.免疫组化检测Sp17在妇科肿瘤组织中表达情况。卵巢原发上皮性癌组织31例中，13例表达Sp17，阳性率为42％；子宫内膜癌16例中，Sp17阳性11例，阳性率为68.7％；卵巢性索-间质肿瘤和生殖细胞瘤共7例，均未见表达Sp17。 以上研究结果提示Sp17可能成为卵巢癌诊断和子宫内膜癌的辅助标志。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号、变量、缩略词等本论文专用术语的注释表

东南大学学位论文独创性声明及使用授权声明

前 言

文献综述：精子蛋白17的研究进展

第一章精子蛋白17 mRNA在卵巢癌中的表达及临床意义

第二章人精子蛋白17基因的克隆及原核表达

第三章人精子蛋白17单克隆抗体的制备及鉴定

第四章免疫组化检测妇科肿瘤中Sp17的异常表达

结论

致谢

参考文献

作者简介