滋阴泻火方对雌性真性性早熟大鼠性腺轴及生长轴功能影响的实验研究

摘要

目的：探讨滋阴泻火方一儿科II号合剂对雌性真性性早熟大鼠下丘脑一垂体一性腺轴和下丘脑一垂体-生长轴的影响及其作用机制。 方法：26日龄雌性sD大鼠60只，随机分为六组。正常对照组：用生理盐水1.0ml灌胃及0.2ml皮下注射；性早熟模型组：用N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA 40mg/kg)皮下注射建立性早熟模型；亮丙瑞林组：NMA皮下注射，亮丙瑞林(100μg/kg)皮下注射；中药大剂量组：NMA皮下注射，滋阴泻火方(30ml/kg)灌胃；中药中剂量组：NMA皮下注射，滋阴泻火方(15ml/kg)灌胃；中药小剂量组：NMA皮下注射，滋阴泻火方(7/5m1/kg)灌胃。每日观察各组大鼠的阴道口开放情况。性早熟模型组阴道口开放后，各实验组停止注射NMA，正常对照组停止皮下注射生理盐水，每日行阴道涂片，观察其性周期的变化，模型组大鼠建立第一个发情期后于动情前期将该动物处死。其余各组按1：1比例同时处死。放免法测定血IGF-I水平，实时荧光定量聚合酶链反应法(real time RT PCR)测定下丘脑GnRH mRNA含量以及垂体GH mRNA含量，计算卵巢指数和子宫指数，观察卵巢组织切片黄体的出现情况，外周骨定量断层扫描(PQCT)测定胫骨骨密度。 结果：1)性早熟模型组出现了规则的性周期并且其青春发育指标(下丘脑GnRH mRNA含量、卵巢指数、子宫指数及卵巢黄体出现率)和生长指标(垂体GH mRNA含量、血IGF-I水平及胫骨骨密度)均大于或高于正常对照组(p<0.05)；2)中药大、中剂量组的青春发育指标和生长指标均小于或低于性早熟模型组(P<0.05)，中药大、中剂量组两者之间差异无显著性(P>0.05)；与正常对照组之间差异无显著性(P>0.05)，与亮丙瑞林组大鼠比较差异均无显著性(P>0.05)；3)中药小剂量组青春发育指标和生长指标与性早熟模型组之间差异无显著性(P>0.05)，均大于或高于正常对照组(P<0.05)。 结论：1)NMA诱发雌性大鼠的性早熟模型是真性性早熟；2)滋阴泻火方可以抑制NMA诱发雌性大鼠性早熟的发生，其作用和亮丙瑞林无明显差异；3)滋阴泻火方能抑制真性性早熟模型大鼠下丘脑GnRH mRNA的表达，并抑制其卵巢和子宫的发育，推测该方对下丘脑一垂体一性腺轴有抑制作用：4)滋阴泻火方能抑制真性性早熟模型大鼠垂体GH mRNA的表达，降低血IGF-I水平及胫骨骨密度，推测该方对下丘脑-垂体-生长轴有抑制作用；5)滋阴泻火方大、中剂量对下丘脑-垂体-性腺轴以及下丘脑-垂体-生长轴的抑制作用无明显的量效关系。

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文摘

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前 言

文献综述

第一章材料与方法

1研究对象

2主要试剂

3主要仪器

4实验方法

4.1动物实验

4.2性腺和性器官的检查

4.3下丘脑和垂体总RNA的提取以及下丘脑GnRH mRNA和垂体GH mRNA荧光定量PCR

4.4放射免疫法测定血IGF-I水平

4.5胫骨骨密度测定

5.数据处理与统计学分析

第二章实验结果

1.大鼠阴道口开放的时间(VO)

2.大鼠第一个发情间期出现的时间(D1)

3.阴道细胞涂片(vaginal smear)

4.卵巢指数(index of ovary)和子宫指数(Index of uterus)

5.卵巢黄体出现率(incidence of corpora lutea)

6.总RNA纯度测定

7.检测RNA完整性

8.相对定量标准曲线

8.1割胶纯化前电泳结果(图14)和纯化后再次PCR电泳结果(图15)

8.2机器自动生成的标准曲线结果(表6，图16)

9.下丘脑GnRH mRNA实时荧光定量PCR结果

10.垂体GH mRNA实时荧光定量PCR结果

11.放射免疫法测定血IGF-I水平

12.PQCT仪定量测定大鼠胫骨骨密度(BD)水平

第三章讨论

1.性早熟模型的建立和评价

2.GnRHa及滋阴泻火方对特发性真性性早熟下丘脑-垂体-性腺轴的影响

3.GnRHa及滋阴泻火方对特发性真性性早熟下丘脑-垂体-生长轴及骨骼的影响

4.问题与展望

结论

致谢

参考文献

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