滋阴泻火方干预真性性早熟模型大鼠的实验研究——对下丘脑-垂体-性腺轴及骨密度的影响

摘要

目的：观察滋阴泻火方对性早熟模型大鼠下丘脑-垂体-性腺轴功能及骨密度的影响，评估滋阴泻火方干预性早熟大鼠的疗效并探讨其治疗性早熟的机理。 方法：26日龄雌性SD大鼠60只，随机分为6组。分别为正常对照组(N组)、性早熟模型组(P组)、亮丙瑞林组(L组)、中药大剂量组(C-L组)、中药中剂量组(C-M组)和中药小剂量组(C-low组)。P组、L组、C-L组、C-M组和C-low组建立由N-甲基-DL-天冬氨酸(NMA)诱导的性早熟模型(NMA 40mg/kg，每日下午2:00和4：00分别皮下注射)。L组、C-L组、C-M组C-lowf组在建立模型的同时，分别用亮丙瑞林(100 μ g/kg，皮下注射，1次/日)、中药大剂量(30ml/kg，灌胃，1次/日)、中药中剂量(15ml/kg，灌胃，1次/日)和中药小剂量(7.5ml/kg，灌胃，1次/日)进行干预。P组大鼠出现第一个动情前期的当天下午2:00将其处死，其余各组同时处死。处死时计算各组大鼠的卵巢指数和子宫指数，观察卵巢黄体出现率；采用实时荧光定量PCR法(real-time RT-PCR)测定下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)mRNA表达水平和垂体促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)mRNA表达水平；采用外周骨定量断层扫描技术(PQCT)测定胫骨骨密度(BD，包括总骨BD、骨小梁BD和骨皮质BD)。 结果：①与N组比较，P组卵巢指数、子宫指数、下丘脑GnRH mRNA表达水平、垂体GnRH-R mRNA表达水平以及胫骨骨BD(主要为骨小梁BD)显著升高(P<0.05)，而L组、C-L组、C-M组上述指标未见统计学差异(P>0.05)；②与P组比较，L组、C-L组、C-M组以上指标显著降低(P<0.05)，而C-low组上述指标未见统计学差异(P>0.05)；③与L组比较，C-L组、C-M组以上指标未见统计学差异(P>0.05)；④C-L组与C-M组两者之间比较，以上指标未见统计学差异(P>0.05)。 结论：①NMA诱导的雌性大鼠性早熟模型是真性性早熟模型；②滋阴泻火方大、中剂量及亮丙瑞林能抑制NMA诱导的雌性大鼠性早熟的发生，使大鼠的性腺发育和功能状态以及BD维持在正常青春前期水平；③滋阴泻火方大、中剂量对大鼠性早熟模型的抑制作用与亮丙瑞林相似；④滋阴泻火方大、中剂量组之间，未见量效关系；⑤滋阴泻火方大、中剂量可以下调性早熟模型大鼠下丘脑GnRH和垂体GnRH-R基因的表达，并可能由此抑制下丘脑-垂体-性腺轴的功能，推测该作用可能是滋阴泻火方治疗性早熟的主要机理。

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前言

文献综述

第一章材料与方法

1.研究对象

2.主要试剂

3.主要仪器

4.实验方法

4.1动物实验

4.2性腺检查

4.3下丘脑GnRH mRNA、垂体GnRH-R mRNA荧光实时定量PCR测定

4.4胫骨骨密度的测定

5.数据处理与统计学分析

第二章结果

1.大鼠阴道口开放的时间及第一个动情间期出现时间

2.阴道细胞涂片

3.卵巢指数及子宫指数

4.卵巢黄体出现率

5.总RNA纯度测定

6.检测RNA完整性

7.相对定量标准曲线

8.下丘脑GnRH mRNA、垂体GnRH-R mRNA实时定量PCR结果

9.应用PQCT测定大鼠胫骨骨密度结果

第三章讨论

1.性早熟模型的建立和评价

1.1性早熟的发生机制

1.2性早熟模型建立方法的选择

1.3性早熟模型评价指标和相关测定方法的选择

1.4性早熟模型的评价

2.滋阴泻火方对性早熟模型大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的干预

2.1滋阴泻火方对性早熟模型大鼠下丘脑GnRH mRNA的影响

2.2滋阴泻火方对性早熟模型大鼠垂体GnRH-R mRNA的影响

2.3滋阴泻火方对性早熟模型大鼠外周性器官的发育影响

2.4滋阴泻火方与促性腺激素释放激素拟似剂的对照研究

2.5小结

3.滋阴泻火方对骨密度的干预

3.1骨在正常青春期及性早熟中的改变

3.2骨密度的意义及测定方法的选择

3.3滋阴泻火方对骨密度的干预作用及机制

3.4滋阴泻火方与促性腺激素释放激素拟似剂的对照研究

3.5小结

4.问题与展望

结论

致谢

参考文献

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