AngⅡ通过经典途径及MEK途径对肺微血管内皮细胞NF-κB活化的实验研究

摘要

第一部分 目的:探讨血管紧张素II(AngII)对肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-кB(NF-кB)的活性的影响,以及经典途径在AngII介导的NF-кB活化过程中的作用。 方法:本实验分为以下几组,AngII组：10-6mol/L AngII分别刺激HPMEC 0、0.5、1、2、4 h;氯沙坦组：10-6mol/L氯沙坦(AngII1型受体阻滞剂)预先处理HPMEC 1h,再予相同浓度的AngII刺激细胞2h,提取胞浆蛋白和胞核蛋白。凝胶电泳迁移率分析实验(EMSA)观察细胞中NF-кB的DNA结合活性。Western印迹检测细胞浆中抑制因子кB(IкBa)的含量。 结果:AngII刺激HPMEC 0.5h后细胞中NF-кB活性即明显上升(144.5±16.1),在2h达到峰值(270.1±27.2),4h(215.1±17.8)较2h有所下降,但仍高于0h水平,以上各时间点与AngII刺激细胞0h(100±25.1)相比均有显著性差异(P<0.05)。与AngII刺激HPMEC 0h IкBa含量(44.4％±2.1％)相比,0.5h后IкBa含量即开始下降(38.9％±3.6％,P<0.05),2h后IкBa含量下降最为明显(32.6％±2.3％,P<0.05),4h细胞中IкBa含量较2h有所上升,但仍然明显低于AngII刺激0h细胞中IкBa的含量(40.1％±4.7％,P<0.05)。氯沙坦组NF-кB活性及IкBa含量与0h相比无明显差异(115.4±10.7,P>0.05)。氯沙坦组NF-кB活性明显低于AngII刺激2h,该组中IкBa的含量明显高于2h(43.6％±3.7％,P>0.05)。 结论:AngII能通过AT1介导HPMEC中NF-кB活化。经典途径参与了AngII诱导的HPMEC中NF-кB活化过程。 第二部分 目的:探讨丝裂源活化蛋白激酶(MEK)在血管紧张素II(AngII)介导的肺微血管内皮细胞(HPMEC)中核因子-кB(NF-кB)活化中的作用,进一步研究AngII对NF-кB的活化机制。 方法:本实验分为以下几组,AngII组：10-6mol/L AngII分别刺激HPMEC0、0.5、1、2、4 h;氯沙坦组：10-6mol/L氯沙坦(AngII1型受体阻滞剂)预处理HPMEC1h后,再予10-6mol/L AngII刺激细胞2h;U0126组：25μmol/L U0126(MEK阻滞剂)预处理HPMEC 1h后,再予10-6mol/L AngII刺激细胞2h,提取胞浆蛋白和胞核蛋白。凝胶电泳迁移率分析实验(EMSA)观察各组NF-кB活性。Western印迹检测各组抑制因子кB(IкBa)及磷酸化的P65(P-P65)含量。 结果:与AngII刺激0h NF-кB活性(100±9.21相比,0.5h后NF-кB活性即开始上升,且在2h达到峰值(276.1±20.4,P<0.05),氯沙坦组中NF-кB活性与0h相比无显著性差异(110.4±8.7,P>0.05),但明显低于AngII刺激2h NF-кB活性。U0126组NF-кB活性较AngII刺激2h明显下降(195.4±13.2,P<0.05),但仍然高于0h水平。 AngII刺激HPMEC 0h细胞中IкBa含量为44.4％±2.2％,0.5h后IкBa含量即开始下降,2h下降最为明显(36.6％±2.3％),氯沙坦组IкBa含量(43.6％±1.4％)与0h相比无显著性差异,U0126组IкBa含量(38.5％±2.1％)与2h相比无显著性差异。AngII刺激细胞0.5h后P-P65含量即开始上升(12.9±0.3),与0h含量(9.4±0.7)相比有显著性差异,2h达到最高值(21.5±1.1),4h后有所下降(18.5±0.7)。氯沙坦组及U0126组中P-P65含量(10.3±0.9,10.4±0.5)与AngII刺激2h有显著性差异,氯沙坦组P-P65含量与U0126组相比无显著性差异。 结论:MEK依赖的P65磷酸化参与了AngII介导的HPMEC中NF-кB活化作用。

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文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

文献综述 血管紧张素-Ⅱ介导的NF-κB活化信号传导通路的研究进展

实验材料及仪器

实验一：血管紧张素-Ⅱ通过经典途径活化肺微血管内皮细胞NF-κB的实验研究

实验二：MEK依赖的P65磷酸化在AngⅡ介导的HPMEC中NF-κB活化作用的实验研究

小结

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