伊马替尼对白血病相关抗原RHAMM特异性CD8+ T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞抑制的研究

摘要

东南大学发育与疾病相关基因教育部重点实验室伊马替尼是治疗慢性粒细胞性白血病(CML)的高效药物。对于异基因干细胞移植(allo-SCT)后有残留病灶或复发的病人来说，理想的治疗策略还在争论之中：单独的供者淋巴细胞输注(DLIs)、单独使用伊马替尼或两者的结合都在临床使用之中。鉴于已经有报导伊马替尼对抗病毒特异性的CD8+T淋巴细胞有抑制作用，我们觉得有必要探讨该药是否也对抗白血病特异性的CD8+T淋巴细胞有损害作用。另外，对CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)的影响也值得进一步探讨。伊马替尼可能会影响杀伤性T细胞和调节性T细胞两者之间的平衡。首先，我们用混合淋巴细胞肽培养(MLPC)、四聚物染色/多色荧光激活的细胞分选(FACS)分析技术、酶联免疫斑点(ELISPOT)试验和<'51>铬释放试验揭示在HLA-A2阳性的allo-SCT治疗后的CML患者和健康献血员中存在来源于透明质酸介导的细胞游走受体(RHAMM)的R3肽(氨基酸序列为ILSLELMKL，一种来源于白血病相关抗原RHAMM/CD168的T细胞表位肽)的特异性效应性CD8+T细胞，而且来自于健康献血员和allo～SCT后的CML病人的R3肽特异性的CD8+T细胞可以在体外进行扩增，并能有效杀伤HLA-A2阳性表达的CML祖细胞。其次，经过MLPC，使用四聚物染色/FACS分析技术、ELISPOT和<'51>铬释放试验评价了伊马替尼对来自于健康献血员和allo-SCT后的CML病人的CD8+T淋巴细胞的影响以及经抗-CD3和CD8抗体刺激三天后的CD4+CD25+Tregs的影响。在1到25μM剂量范围之内，伊马替尼呈剂量依赖性地抑制R3肽特异性的CD8+T淋巴细胞增殖和功能激活。这种特异性的CD8+T淋巴细胞释放干扰素(IFN)-γ和颗粒酶B(Gzm-B)功能被显著性地抑制。这种T细胞为具有CD8+HLA-A2/R3四聚物+WT-1四聚物-CD45RA+C27-CD28-CCR7-表型特征的效应性T细胞。它们具有溶解R3肽标记的T2细胞和CD34+CML祖细胞。伊马替尼对CD8+T淋巴细胞的抑制作用不是通过凋亡而致，并且在该药撤除后能逆转。另外，伊马替尼还能呈剂量依赖性地显著抑制CD4+CD25+FoxP3+GITR+TGFβ1+CD69+CD152+Tregs的增殖和功能。allo-SCT和/或DLIS使用伊马替尼并不一定影响移植物抗白血病反应(GVL)，GVL可能更主要取决于CD8+T细胞和CD4+CD25+Tregs的比例。