Ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及意义

摘要

目的：研究ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达情况，并观察转染野生型的ezrin和merlin基因后，对胰腺癌细胞生物学行为的影响。
　　 方法：应用RT-PCR与Western blot方法检测ezrin和merlin基因在人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)及人胰腺癌细胞(COLO357、SW1990、PANC1、CAPAN1、CAPAN2、CFPAC1和BXPC3)中的mRNA和蛋白表达水平；应用DNA测序的方法对在胰腺癌中表达的ezrin和merlin两种基因进行序列分析；利用脂质体将重组质粒(pcDNA3.1+HA-ezrin和pcDNA3.1+HA-merlin)转染入人胰腺癌细胞株SW1990中，应用扫描电子显微镜、MTT实验、流式细胞学技术、Transwell迁移实验和细胞-基质黏附实验来观察两组转染基因对细胞形态结构、生长增殖能力、细胞周期及凋亡、细胞迁移和黏附能力的影响。
　　 结果：Ezrin和merlin基因在8株细胞中均有不同程度的表达，其表达水平与胰腺癌细胞的分化程度无关；通过对胰腺癌细胞中表达的ezrin和merlin基因CDS区测序发现，ezrin基因DNA序列与基因库序列完全一致，而merlin基因在第7外显子的第1074位点存在碱基G的插入，第8外显子的第1116和1142位点存在碱基T的缺失，编码氨基酸第211位至第233位序列发生改变，表明在胰腺癌细胞中表达的Ezrin是野生型蛋白，而Merlin是突变型蛋白，失去了抑癌作用。Western blot显示转染后细胞过度表达Ezrin蛋白对细胞内突变型Merlin蛋白表达情况无明显影响；经野生型merlin基因转染后细胞，野生型Merlin蛋白的表达对Ezrin蛋白的表达亦无明显影响。与对照组相比较，转染野生型ezrin基因的SW1990细胞形态结构无明显改变，而转染野生型merlin基因的SW1990细胞，贴壁细胞数量减少，细胞表面微绒毛及丝状伪足明显减少；转染野生型ezrin和merlin基因的SW1990细胞其生长速度缓慢(P＜0.01)；转染细胞的细胞周期改变表现为G1期细胞增多，S期细胞减少(均为P＜0.05)；细胞与基质的黏附能力有明显下降(P＜0.01)；且转染merlin的SW1990细胞其迁移能力亦有明显降低(P＜0.05)，而转染ezrin的SW1990细胞其迁移能力无明显统计学意义的改变(P＞0.05)。Ezrin和Merlin蛋白的过度表达对细胞的生长增殖能力、细胞周期、迁移能力以及细胞-基质黏附能力均有一定的影响。
　　 结论：人胰腺癌细胞中存在着野生型ezrin和突变型merlin基因的不同程度的表达；野生型ezrin基因与胰腺肿瘤细胞的生长增殖和黏附能力有着密切的关系，而与胰腺肿瘤细胞的迁移能力无明显关系；野生型merlin基因的表达可抑制胰腺癌细胞的生长增殖、迁移以及细胞基质黏附。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表(Abbreviations)

声明

前言

文献综述 Ezrin和Merlin蛋白的研究进展

第一部分 检测人胰腺癌细胞中ezrin和merlin基因表达及突变的情况

第二部分野生型基因ezrin和merlin对SW1990细胞生物学活性的影响

讨论

结论

致谢

参考文献

附录

作者简介