低氧诱导因子抑制剂对白血病K562/A02细胞VEGF和mdr1/P-gp表达及逆转多药耐药的研究

摘要

目的：本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-（5'-Hydroxymethyl-2'-furyl）-1-benzylindazole（YC-1）对人白血病耐阿霉素细胞K562/A02的血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowth factor，VEGF）和多药耐药基因1（multidrug resistance gene1，mdrl）/P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）表达影响，并探讨其逆转多药耐药的可能机制，为白血病的治疗提供一定的理论基础。
　　 方法：采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测不同浓度YC-1对K562/A02细胞和K562细胞增殖抑制效应；MTT和流式细胞仪法（FCM）分别检测0、5、10和20μ mol/L YC-1单独或联合1mg/L阿霉素（adfiamycin，ADM）作用K562/A02细胞48小时后细胞耐药逆转效应和凋亡率及细胞内阿霉素浓度；应用DAPI染色观察凋亡细胞形态；半定量RT-PCR检测各组细胞低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor，HIF-1α）、mdrl和VEGF mRNA水平变化；Western blot检测各组细胞HIF-1α、P-gp和VEGF蛋白表达变化。
　　 结果：K562与K562/A02对阿霉素的IC50值分别为（1.56±0.07）mg/L和（42.98±3.15）mg/L，耐药倍数为27.55倍。予5、10和20μ mol/L YC-1作用后，K562/A02细胞对阿霉素的耐药倍数分别为24.63、16.38和10.71倍。0、5、10和20μ mol/L YC-1单独处理K562/A02细胞48小时后，凋亡率分别为（1.9±0.9）％、（4.9±0.9）％、（5.8±1.1）％和（9.3±1.4）％，其中5μmol/L与10μmol/L组间无统计学差异（p=0.34），其余各组间均存在统计学差异（p<0.01）。0、5、10和20μ mol/L YC-1联合1mg/L阿霉素处理K562/A02细胞48小时后，凋亡率分别为（2.34±0.7）％、（8.2±1.2）％、（19.4±1.7）％和（34.54±2.4）％，各组间均存在统计学差异（p<0.01）；DAPI染色可见随着YC-1浓度增加，细胞核逐渐呈现波纹状或折缝样，部分染色质出现浓缩状态，或细胞核染色质高度凝聚、边缘化，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。0、5、10和20μ mol/L YC-1分别联合1mg/L阿霉素处理K562/A02细胞48小时后细胞内阿霉素荧光强度分别为232±33、1300±219、1961±240和3342±269，各组间均存在统计学差异（p<0.01）。随着YC-1浓度增加，可见HIF-1α mRNA水平没有明显差异，mdrl和VEGF mRNA逐渐下调，HIF-1α、P-gp和VEGF蛋白均下调。
　　 结论：YC-1可以通过抑制HIF-1α蛋白表达，下调mdrl和VEGFmRNA水平及P-gp和VEGF蛋白水平，单独应用YC-1作用K562/A02细胞可以产生较弱促凋亡作用，联合1mg/L阿霉素后由于增加细胞内阿霉素药物浓度，使细胞凋亡率增多，从而部分逆转K562/A02细胞耐药。

目录

文摘

英文文摘

缩略词

前 言

文献综述

第一部分 材料与方法

第二部分 实验结果

第三部分 讨 论

第四部分 全文小结

致 谢

参考文献

作者简介