羟丁酸钠对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能及homer1a蛋白表达的影响

摘要

目的:观察脑缺血再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion,I/R)对大鼠神经功能和学习记忆能力的影响及预先给予羟丁酸钠(Sodium Oxybate，SO)对神经损伤的保护作用。并检测信号转导蛋白Homerla在该病理过程的表达变化，探讨SO在防治脑I/R中的可能机制。
　　 方法:体重为250-280g的健康雄性SD大鼠，随机分为假手术对照组（sham组），缺血再灌注组(I/R组)和羟丁酸钠实验组（SO组）；采用大脑中动脉栓塞法(MiddleCarotids Arterial Occlusion，MCAO)建立I/R模型，sham组所有操作同I/R组但不行线栓栓塞；SO组在MCAO前30min腹腔注射SO100mg·kg-1，后每12h注射一次，其余两组注射同体积的生理盐水。由I/R引起的神经病理性损伤及Homer蛋白检测分为三部分：①神经损伤严重度评分(Neurologic Severity Scores，NSS)法评估各组大鼠I/R后6h、12h、24h、48h及72h神经功能缺损的情况，每组30只，再根据时间点进一步划分，每个亚组6只(n=6)。I/R损伤引起的神经元病理学改变采用TTC染色和HE染色比较各组脑皮层梗死体积和海马CA1区存活神经元比例检查；②水迷宫实验则评价手术72h后连续5天大鼠学习记忆能力的变化(n=8)；③免疫荧光结合Western-blot技术观察大脑海马及额顶叶皮层Homerla蛋白在I/R后1h、12h、24h及72h表达情况及应用SO对其表达水平的影响。荧光染色及Western-blot每组各12只，再据时间点划分(n=3)。
　　 结果:①I/R组及SO组大鼠较sham组均发生明显的神经功能障碍(P＜0.05)，应用SO的大鼠NSS评分低于缺血再灌注组（P＜0.05）。术后24hTTC染色显示SO组大鼠皮层梗死体积小于I/R组（P＜0.05），HE染色示SO组较I/R组有更高的神经元存活率(P＜0.05）；②在水迷宫测试中，三组大鼠游泳速度无明显差异(P＞0.05)，而SO组较I/R组潜伏期短(P＜0.05)；③与对照组相比，I/R损伤后可迅速诱导脑内Homerla蛋白的表达至术后72h。应用SO后Homerla蛋白在脑内的表达与I/R组有差异，1h时其表达量低于I/R组(P=0.04)，72h时其表达量高于I/R组(P＜0.001)。
　　 结论:①羟丁酸钠可改善I/R引起的神经功能障碍和海马相关的学习记忆能力损害，具有抗缺血性损伤的神经保护作用；②I/R可诱导脑内信号转导蛋白Homerla快速表达，在再灌注损伤后迅速达到高峰，而羟丁酸钠的应用可以影响到该蛋白表达变化，推测SO在缺血再灌注损伤中的作用机制可能与Homerla蛋白表达改变有关。