建立nano-Fe2O3 PD大鼠模型及与6-OHDA PD大鼠模型的比较研究

摘要

目的:1、探讨纳米三氧化二铁(nano-Fe2O3)与6-羟基多巴胺(6-OHDA)对大鼠学习记忆功能的影响及差异；2、探讨nano-Fe2O3与6-OHDA对腹侧中脑的损伤作用及差异；3、探讨nano-Fe2O3作为诊疗药物载体的安全性；4、探讨用nano-Fe2O3制作PD大鼠模型的可行性。
　　 方法:1.Y-型迷宫、Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力；2.立体定位下,建立nano-Fe2O3与6-OHDA PD大鼠模型；模型大鼠中脑黑质致密部(SNc)和腹侧被盖区(VTA)各注射1μl nano-Fe2O320g·L-1和1μl6-OHDA9g·L-1,分别于药后1周、2周、3周和4周组进行Y-型迷宫及Morris水迷宫检测并用阿扑吗啡(APO)诱导观察其行为学变化；3、取大鼠中脑行Perls反应法+免疫组织化学染色及免疫荧光染色,观察DA能神经元、胶质细胞的变化情况。
　　 结果:1.Y-型迷宫结果显示:与正常对照组相比,生理盐水组的全天总反应时间(TRT)和错误反应次数(EN)无差别(P＞0.05),nano-Fe2O3组和6-OHDA组药后第2、3周TRT变长(P＜0.05),EN变多(P＜0.05)。6-OHDA组与nano—Fe2O3组相比第3周TRT变长(P＜0.05),其余无统计学差异(P＞0.05)。2.Morris水迷宫结果显示:与正常对照组相比,生理盐水组对大鼠游泳速度、找到平台时间、潜伏期及搜索平台策略评分无影响(P＞0.05),nano-Fe2O3组和6-OHDA组药后第2、3周,大鼠找到平台时间和潜伏期明显延长,搜索平台策略评分减少(P＜0.05)；nano-Fe2O3组和6-OHDA组药后各组较正常对照组游泳速度明显下降(P＜0.05),nano-Fe2O3组和6-OHDA组比较无统计学差异(P＞0.05)。3.APO诱导后结果显示,正常对照组和生理盐水组行为学与未注射APO前无明显变化,6-OHDA组出现典型旋转行为,nano-Fe2O3组未见有旋转行为,但出现震颤、活动迟缓、竖毛、嗅探、尾僵、易激惹、咬尾或足等异常行为。4.Perls反应+免疫组织化学染色结果显示,在SN和VTA,正常对照组、生理盐水组和6-OHDA组均未见双标细胞；nano-Fe2O3组药后1～4周均可见TH+／iron+、GFAP+／iron+、OX-42+／iron+双标细胞,但双标细胞数量组内两两比较无统计学差异(P＞0.05)。在SN和VTA,与正常对照组相比,生理盐水组TH+细胞无显著差异(P＞0.05),nano-Fe2O3组和6-OHDA组毁损侧TH+细胞数量减少(P＜0.05),以6-OHDA组更为显著,nano—Fe2O3组少数TH+细胞胞浆内有nano-Fe2O3沉积,nano-Fe2O3组和6-OHDA组健侧TH+细胞与正常对照组无显著差异(P＞0.05)；与正常对照组相比,生理盐水组GFAP+细胞于第1周注射侧增加(P＜0.05),第2、3、4周注射侧和未注射侧无差异(P＞0.05),nano-Fe2O3组和6-OHDA组毁损侧和健侧GFAP+细胞数量增加(P＜0.05),以毁损侧增加更为显著,同侧同时程的nano-Fe2O3组和6-OHDA组相比无差异,nano-Fe2O3组毁损侧少数GFAP+和OX-42+细胞内有吞噬nano-Fe2O3颗粒；在海马区可见GFAP+细胞,与正常对照组相比,生理盐水组在注射后1周双侧GFAP+细胞数目增加(P＜0.05),第2周以后与正常对照组无显著差异(P＞0.05),6-OHDA组和nano-Fe2O3组双侧GFAP+细胞数目增加(P＜0.01),同时程的nano-Fe2O3组和6-OHDA组相比无差异(P＞0.05),各组双侧对比GFAP+细胞数量无差异(P＞0.05)。
　　 结论:脑内注射nano-Fe2O3和6-OHDA均能引起DA能神经元的破坏和胶质细胞反应性增生,影响动物的认知功能；用nano-Fe2O3制作的大鼠模型行为学可出现类PD变化；6-OHDA比nano-Fe2O3对腹侧中脑DA能神经元的毒性作用更强,对动物的学习记忆和运动行为影响更明显,尤其是运动行为。