骨髓间充质干细胞诱导的胆管内皮细胞与电纺纳米纤维相容性的初步研究

摘要

目的:探讨体外诱导猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化为肝干细胞,从而进一步分化为胆管内皮细胞的可行性;制备电纺纳米纤维并研究分化胆管内皮细胞与电纺纳米纤维的生物相容性,为组织工程胆管种子细胞来源及支架材料的选择提供实验依据。
　　 方法:(1)体外培养并纯化猪BMSCs,通过定向诱导方法,将其分化为胆管内皮细胞,并通过形态学及RT-PCR对分化完成的细胞加以鉴定。(2)用静电纺丝方法制备PLGA纳米纤维膜,通过扫描电镜观察其微观形貌,并测定其短期(2周)体外降解率。(3)将分化的胆管内皮细胞与纳米纤维复合培养,通过计算细胞贴壁率和MTT法检测细胞在纳米纤维表面粘附、增殖能力,荧光染色观察细胞形态及在材料表面的分布情况,扫描电镜观察细胞在纳米纤维表面生长形貌。
　　 结果:(1)体外定向诱导分化BMSCs四周后,细胞呈现典型树枝状胆管内皮细胞形态学改变,RT-PCR检测分化细胞有胆管内皮细胞表面标记CK19的表达;(2)扫描电镜照片显示电纺材料为连续的纳米纤维,纤维直径均分布在200-500nm范围内,在短期(2周)PLGA纳米纤维没有发生明显的变形;(3)通过细胞贴壁率计算、MTT法检测、荧光染色及扫描电镜观察证明分化细胞在PLGA纳米纤维上增殖能力良好。
　　 结论:(1)骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外经诱导具有向胆管内皮细胞分化的能力;(2)静电纺丝方法制备的材料为纳米纤维结构,在短期(2周)没有发生明显的降解;(3)分化后的细胞与电纺纳米纤维生物相容性良好。