基于电纺纳米纤维组织工程胆管支架体内实验的初步研究

摘要

目的:观察不同质量比聚乳酸/羟基乙酸(PLGA)胆总管支架在体外胆汁中质量、外形及微观形态变化的情况，找出在胆总管损伤中可替代胆道结构和功能的理想质量比的支架。并通过动物实验探索可降解支架修复胆道损伤的可行性和安全性。
　　 方法:(1)用静电纺丝方法制备不同质量比的PLGA纳米纤维膜，通过扫描电镜观察其微观形貌，并测定其短期体外胆汁中降解率。(2)利用可降解的静电纺丝PLGA纳米纤维设计一种简易的胆道内支架模型。以3头小型猪为实验对象，随机分配后每一头猪分别行不同的手术方法，第一头及第二头先行胆总管前壁纵形切开1.0cm，然后第一头直接行胆总管一期缝合术，第二头放置内支架后行胆总管缝合恢复胆道连续性。第三头先切除部分胆总管前壁，放置内支架后不予缝合胆总管，构建胆总管缺损修复模型。术后观察动物黄疽和胆漏情况;术后1月处死所有实验用猪，分别比较动物自身术前和术后肝酶(ALT、AST、ALP)和血胆红素的变化;观察三头猪大体标本、肝脏组织病理切片HE染色、胆管损伤部位病理形态学改变:包括HE染色、Masson染色和α-SMA、PCNA免疫组化。
　　 结果:(1)扫描电镜照片显示电纺材料为连续的纳米纤维，纤维直径均分布在200-500nm范围内，在短期（2周）PLGA75/25和90/10两种比例的纤维在胆汁中没有发生明显的降解变形。(2)三头猪均顺利完成手术，术后无黄疸及胆漏发生。动物肝酶(ALT、AST、ALP)和血胆红素水平术前和术后比较无显著性差异。三头猪术后1月可见吻合口局部轻度水肿充血，未见明显狭窄，第一头及第三头猪胆管无扩张，第二头猪近端胆管轻度均匀扩张。术后1月三头猪胆管切片HE染色，镜下均可见较多炎症细胞浸润，以巨噬细胞及淋巴细胞为主，粘膜下固有层胶原纤维增生，纤维结构紊乱，可见小血管增生，第三头较第一、第二头增生的胶原纤维少。三组肝脏切片镜下均未见淤胆和炎性细胞浸润。Masson染色见术后1月胶原纤维增生伴有纤维化，排列较为紊乱，第三头猪胶原增生程度最轻，排列相对有序，第一头增生最为严重。α-SMA免疫组化评分第一头最高，第三头最低。PCNA免疫组化示第三头胆管缺损区域有新生胆管上皮细胞形成。
　　 结论:(1)静电纺丝方法制备的材料为纳米纤维结构，PLGA75/25和90/10两种比例的纤维在胆汁环境中短期（2周）没有发生明显的降解;(2)在保护胆管血供、实现无张力修复的前提下，可降解静电纺PLGA支架能有效支撑、修复胆管，为胆管损伤的治疗提供了一个新的材料，并且部分缺损的胆总管具有再生形成新生胆管的能力。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

综述

第一部分：PLGA纳米纤维体外降解实验

一、引言

二、静电纺丝装置

三、实验材料

四、实验方法

五、试验结果

六、讨论

七、实验结论

第二部分：可降解静电纺丝PLGA纳米纤维支架修复胆管损伤的动物初步实验研究

一、引言

二、实验材料和方法

三、结果

四、讨论

五、结论

致谢

参考文献

作者简介