CTLA4Ig局部转基因治疗大鼠小肠移植急性排斥实验研究

摘要

一、大鼠同种异体在体异位节段小肠移植模型的建立.目的:为研究抗小肠移植排斥治疗提供良好的动物实验模型.方法:选用大鼠进行同种异体异位节段性小肠移植.重建供肠血管采用腹主动脉-肾下腹主动脉吻合以及门静脉-肾下下腔静脉吻合.结论:该模型制作成功率较高、适合小肠移植排斥研究.二、大鼠移植肠局部CTLA4Ig基因转染的可行性研究.目的:探讨CTLA4Ig基因能否在移植小肠局部转染表达.方法:移植前经肠系膜上动脉给供肠灌注脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA重组质粒,应用免疫组织学及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达.结论:经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA重组质粒可有效转染移植小肠.三、CTLA4Ig局部转基因对小肠移植急性排斥的治疗作用.目的:研究CTLA4Ig基因在移植小肠局部表达及其表达产物对急性排斥反应的治疗作用.方法:建立SD→Wistar的大鼠异位小肠移植模型,并随机分为实验组(CTLA4Ig转基因组)和对照组(非转基因组).实验组供肠移植前经肠系膜上动脉注入脂质体包襄的CTLA4Ig cDNA重组质粒,术后应用免疫组织学检查移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达.移植术后3,7,10d分别获取各组的移植小肠进行组织学检查及细胞凋亡测定.结论:CTLA4Ig基因可在移植小肠局部转染表达,其表达产物可防止移植术后急性排斥反应的发生.四、移植肠局部CTLA4Ig转基因对受体免疫排斥反应的影响.目的:研究CTLA4Ig基因在小肠局部转染表达及其表达产物对受体免疫排斥反应的影响.方法:移植前经肠系膜上动脉给供肠灌注脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA重组质粒,应用免疫组织学及逆转录多聚酶链反应检测移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达,并观察受体对供肠及供者同系鼠皮肤移植的排斥反应.结论:经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA可有效转染移植小肠,并诱导受体对移植小肠的免疫耐受,但移植肠局部CTLA4Ig基因转染不能诱导出供者特异的外周耐受状态.

目录

前言

ABSTRACT

第一章基本实验技术

第一节免疫组织学检查

第二节RT-PCR

第三节细胞凋亡检测

第二章AAV*CMVmCTLA4Ig质粒制备

第一节培养基的制备：

第二节细菌感受态的制备

第三节小量质粒的提取

第四节所提质粒的质量验证

第五节质粒的大量提取

第三章小肠移植模型制作

第四章移植肠急性排斥反应的组织学观察

第五章大鼠移植肠局部CTLA4Ig基因转染的可行性研究

第六章CTLA4Ig基因局部转染对小肠移植急性排斥的治疗作用

第七章移植肠局部CTLA4Ig转基因对受体免疫排斥反应的影响

综述一小肠移植

综述二CTLA4Ig转基因治疗器官移植排斥

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致谢