肥胖大鼠脂肪组织基因表达谱特征的研究及差异表达基因功能的初步分析

摘要

目的:应用cDNA微阵列(cDNA microarray)技术,研究饮食性肥胖大鼠和NPY Y5受体反义基因治疗后大鼠白色脂肪组织基因表达谱的变化,并对差异表达基因的功能进行初步分析,以探讨肥胖发生的机制.方法:提取脂肪组织mRNA,标记cDNA探针,与含有18000个人类基因片段点的cDNA微阵列(cDNA microarray)杂交,杂交膜信号扫描分析后,对差异表达基因进行生物信息学分析.结论:肥胖大鼠治疗前后的脂肪组织基因表达谱均有其特殊的生物学特征;运用聚类分析,不仅能推测未知基因的功能,而且能推知已知基因的新功能.为发现新基因及已知基因的新功能提供了线索.目的:鉴定TSG-6基因在正常和肥胖儿童脂肪组织中的表达,探讨TSG-6基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中的作用以及TSG-6基因与肥胖发生、胰岛素抵抗之间的关系.方法:(1)首先采用RT-PCR技术检测正常和肥胖儿童皮下脂肪组织中TSG-6基因的表达水平,并测序鉴定.(2)采用细胞培养和RT-PCR技术,在成功诱导3T3-L1脂肪前体细胞分化成熟的基础上,检测诱导分化不同时段脂肪细胞中TSG-6基因的表达水平,并用TNF-α干预分化前脂肪细胞和成熟脂肪细胞,检测TSG-6基因的表达水平.结果:(1)TSG-6基因表达于儿童的脂肪组织,且肥胖儿童皮下脂肪组织中TSG-6基因的表达水平显著高于正常儿童.(2)随着脂肪细胞逐渐分化成熟,TSG-6基因mRNA表达水平逐渐升高.(3)在分化前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中,TNF-α均能在短时间内明显抑制TSG-6基因mRNA的表达,抑制作用随TNF-α浓度增加和刺激时间的延长而明显增强.结论:TSG-6基因可能参与脂肪细胞的分化;TGS-6基因可能参与TNF-α致胰岛素抵抗.

目录

前 言

参考文献

第一部分肥胖大鼠脂肪组织基因表达谱特征的研究

材料与方法

结 果

一、脂肪组织总RNA的甲醛变性胶电泳鉴定

二、cDNA microarray杂交结果：

三、cDNA microarry杂交结果的质量控制

四、差异表达基因的分析

讨 论

一、基因表达谱芯片技术在本研究中的应用

二、运用生物信息学知识进行芯片数据分析

三、饮食性肥胖发生机制及NPY Y5受体反义基因治疗机制的探讨

小 结

参考文献

第二部分差异表达基因—TSG-6与肥胖关系的初步分析

材料与方法

结 果

一、正常组和肥胖组儿童临床资料比较：

二、肥胖儿童腹部皮下脂肪组织中TSG-6基因mRNA的表达

三、TSG-6基因PCR产物的测序结果

四、3T3-L1脂肪细胞诱导分化前后的形态变化和脂肪细胞鉴定

五、3T3-L1脂肪细胞分化过程中TSG-6基因表达水平的变化

六、3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程第0天起持续应用不同浓度TNF-α对TSG-6基因mRNA表达的影响

七、3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程第10天起持续应用不同浓度TNF-α对TSG-6基因mRNA表达的影响

讨 论

小 结

参考文献

英文缩写词表

致 谢

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