胰腺癌分泌的组织蛋白酶-D致肝预转移小生境形成的初步研究

摘要

目的:研究胰腺癌分泌的组织蛋白酶-D是否能诱导肿瘤肝脏预转移小生境的形成，并检测预转移小生境的构成成分，为今后进一步研究胰腺癌肝转移预转移小生境的形成机制奠定基础。
　　方法:采用来源于同一亲本的具有相同遗传背景筛选获得的、具有不同肝转移潜能的人胰腺癌细胞株13.6pl及Colo357分别建立裸鼠原位移植瘤模型，并根据裸鼠接种肿瘤细胞株的种类将裸鼠分为L3.6pl组、Colo357组及假手术空白对照组，于肿瘤的预转移期将实验裸鼠处死，通过WesternBlot、RT-PCR检测上述各组裸鼠预转移肝脏中S100A8、S100A9的蛋白及mRNA水平变化，流式细胞检测并比较上述三组裸鼠肝脏中CD11b+的骨髓衍生细胞的数量，确定胰腺癌肝转移的预转移小生境形成。提取L3.6pl、Colo357细胞的条件培养基、重组组织蛋白酶D（cath-d）及RPMI1640，将其通过尾静脉注射入裸鼠体内，建立起无瘤荷的预转移模型:L3.6pl组、Colo357组、Cath-d组及空白对照组，使用WesternBlot、RT-PCR及流式细胞术检测上述上述各组裸鼠肝脏中预转移小生境的形成情况。
　　结果:高肝转移潜能L3.6pl组裸鼠肝脏中S100A8、S100A9mRNA表达及蛋白表达水平明显高于Colo357组及空白对照组(p＜0.05)，其中S100A8mRNA的相对表达量为空白对照组的167％±11.1％，S100a9为163％±5.90％;而Colo357组与空白对照组无明显差异(p＞0.05)。流式细胞检验提示L3.6pl组中CD11b阳性BMDCs数量明显高于Colo357组及空白对照组(p＜0.05)，而Colo357组与空白对照组间无明显差异(p＞0.05)，其中L3.6pl组裸鼠肝脏中的CD11b阳性BMDC占肝脏细胞总数的2.60％±0.0578％;Colo357组仅占0.433％±0.145％;而空白对照组中仅占0.200％±0.0578％。无瘤荷的L3.6pl组裸鼠肝脏中S100A8、S100A9mRNA表达及蛋白表达水平较Colo357组及空白对照组明显提高(p＜0.05);Cath-D组裸鼠肝脏中的S100A8、S100A9mRNA表达及蛋白表达水平高于Colo357组及空白对照组(p＜0.05);其中L3.6pl组S100A8mRNA的相对表达量为空白对照组的165％±4.82％，S100a9为163％±5.90％，Cath-d组S100A8mRNA的相对表达量为空白对照组的132％±4.71％，S100a9为129％±8.81％;而Colo357组与空白对照组无明显差异(p＞0.05)。L3.6pl组中肝脏中的CD11b阳性BMDC占肝脏细胞总量的2.07％，Cath-d组占1.52％，Colo357组仅有0.315％，空白对照组为0.150％，L3.6pl组及Cath-d组显著高于空白对照组及Colo357组(p＜0.05)，而空白对照组与Colo357间无明显差异(p＞0.05)。
　　结论:高肝转移性潜能的胰腺癌细胞株L3.6pl分泌的Cath-d能诱导预转移小生境。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一章 文献综述 肿瘤预转移小生境形成机制的研究进展

1、诱导预转移小生境的形成的因素

2、预转移小生境的细胞构成

第二章：原位移植瘤实验

(一)实验材料

(二)实验方法

(三)实验结果

(四)讨论

第三章：条件培养基实验

(一)实验材料

(二)实验方法

(三)实验结果

(四)讨论

结论

致谢

参考文献

作者简介