激肽释放酶激肽系统在心肌梗死后的保护机制的研究

摘要

目的：心肌缺血后引起的心肌细胞死亡和炎症导致心室重构及心力衰竭是人类死亡的主要原因之一，而组织激肽释放酶一激肽系统是存在于心血管系统中的重要的血管活性调节肽。本课题主要研究组织激肽释放酶-激肽系统在大鼠心肌梗死后抑制超氧化物造成的损伤、改善心功能的机制，为进一步揭示激肽释放酶激肽系统的保护作用提供研究基础和新的思路。 本课题分为三部分： 第一部分：在急性心肌梗死的状态下研究组织激肽释放酶抑制心肌细胞凋亡，减轻炎症反应及超氧化物形成，改善心功能的机制。在鼠冠状动脉左前降支结扎后立即给予纯化的组织激肽释放酶及缓激肽B2受体拮抗剂1天及7天。急性心梗后1天，组织激肽释放酶显著减少心肌梗死面积，抑制细胞凋亡并增加一氧化氮的合成，提高Akt及GsK-3β的磷酸化，抑制caspase-3的活化。连续7天使用激肽释放酶后，心脏收缩功能增强，心梗导致的左心室游离壁变薄被抑制，梗死区域内炎症细胞浸润及超氧化物的形成明显受到抑制。此外，组织激肽释放酶抑制心肌梗死造成的JNK，P38MAPK，lkα的磷酸化及NFkB的活性。组织激肽释放酶保护心肌，抑制炎症及超氧化物形成的作用均被缓激肽B2受体拮抗剂阻断。这些结果说明组织激肽释放酶通过缓激肽B2受体激活一氧化氮合成，促进Akt及GSK-3β的磷酸化，抑制细胞凋亡，抑制MAPK信号传导通路及NFkB的激活而抑制超氧化物形成、炎症反应并改善心功能。 第二部分：在慢性心衰模型上研究组织激肽释放酶和缓激肽对改善心室重构恢复心功能的作用机制。在冠状动脉结扎后1周，使用纯化的组织激肽释放酶及缓激肽连续皮下灌注4周，5周后处死动物。检测各组动物的心功能，组织激肽释放酶及缓激肽治疗组的心功能明显优于对照组，而对梗死面积没有影响。组织激肽释放酶及缓激肽治疗能明显增加非梗死区域新生血管，减少心肌间胶原沉积，抑制心肌肥大形成。此外，治疗组能明显抑制TGF-β、PAI-1的表达和合成及SMAD-2的磷酸化。组织激肽释放酶及缓激肽的治疗效果与其能增加NO的形成及抑制过氧化物的蓄积相关。 第三部分：激肽释放酶在急性心肌梗死后血管新生中的机制研究。在鼠冠状动脉左前降支结扎后1小时，给予腺病毒为载体的人组织激肽释放酶(Ad．HTK)，或同时给予腺病毒载体的突变不能活化的Akt(Ad．DN．Akt)及腺病毒载体的始终激活的GSK-3β(Ad．GSK-3β S9A)在损伤周围做点状注射。10天后显示， Ad．HtTK能明显改善心功能，增加毛细血管和小动脉的数量及VEGF/VEGF受体的表达。这个作用能被Ad．DNAkt、Ad．GSK-3β S9A．所阻断。体外人冠状动脉内皮细胞培养显示：组织激肽释放酶通过GSK-3β-VEGF信号通路，增加血管样结构形成及细胞迁移，组织激肽释放酶的作用能被其抗体、缓激肽B2受体拮抗剂、VEGF中和抗体、VEGF受体阻滞剂所阻断。组织激肽释放酶通过B2受体激活Akt-GSK-3β-VEGF信号通路促进心梗后新生血管形成。本研究的创新点在于通过Akt-GSK-3β是把组织激肽释放酶与VEGF的作用相联系，从而以新的视角解释新生血管形成的机制。

目录

声明

前 言

第一部分 组织激肽释放酶抑制心肌梗死后细胞凋亡、炎症及心室重构的机制研究

第二部分 组织激肽释放酶、缓激肽对心肌梗死后心力衰竭心室重构的影响

第三部分 组织激肽释放酶在急性心肌梗死后血管新生的机制研究

附表

小 结

致 谢

博士期间发表文章

组织激肽释放酶-激肽系统在心血管疾病中的研究进展

附录