PGE通过FAK/Paxillin/Erk途径影响肝细胞癌细胞的黏附、迁移和侵袭能力及相关机制的研究

摘要

研究背景： 肿瘤侵袭和转移是成功治疗肿瘤的最大障碍，也是目前恶性肿瘤病人的主要死因。前列腺素E2(PGE2)能够促进细胞增殖、抑制凋亡、诱导免疫抑制。部分研究还表明PGE2能够增加癌细胞与基质的黏附，促进黏附分子表达，激活细胞骨架系统，促进肿瘤的浸润和转移。对于PGE2诱使肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭的相关分子机制目前仍不十分清楚。 黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)是非受体蛋白酪氨酸激酶。有学者研究发现FAK的过表达与转移癌和淋巴结转移相关，抑制FAK的活性或阻断其表达均能抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。关于FAK及其下游Paxillin信号通路在肿瘤细胞增殖、迁移过程中的作用，目前知之甚少。 本课题通过PGE2对肝细胞癌细胞(hepatocellular carcinoma.cells，HCC)体外作用的实验研究，探讨了PGE2对肝细胞癌细胞黏附、迁移及侵袭的作用及其分子机制。 研究内容： 1.观察PGE2对肝细胞癌Huh7及Hep3B细胞黏附、迁移及侵袭的影响。 2.检测PGE2对肝细胞癌Huh7及Hep3B细胞FAK、Paxillin、Erk2及相关磷酸化蛋白表达的影响。 3.检测EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478对肝细胞癌Huh7细胞黏附、迁移、侵袭能力及Paxillin、Erk2的蛋白表达的影响。 4.检测EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478对PGE2所诱导的肝细胞癌Huh7细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响。 5.探讨FAK/Paxillin/Erk信号转导通路在PGE2影响肝细胞癌细胞黏附、迁移、侵袭能力中可能的作用。 研究方法： 1.细胞培养：取人肝细胞癌细胞株Huh7及Hep3B按常规方法培养。 2.外源性PGE2处理后，使用WST-1法检测肿瘤细胞黏附能力的变化；Transwell小室检测肿瘤细胞迁移能力的变化；Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。 3.Western Blot实验检测外源性PGE2对肝细胞癌Huh7及Hep3B细胞FAK、Paxillin、Erk2及相关磷酸化蛋白表达水平的影响。 4.EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478处理肿瘤细胞后，使用WST-1法检测其黏附能力的变化；Transwell小室检测迁移能力的变化； Transwell小室结合Matrix胶检测侵袭能力的变化；Western Blot实验检测Paxillin及Erk2蛋白表达水平的变化。 5.设对照组、PGE2组及PGE2+AG1478组，使用WST-1法检测其黏附能力的变化；Transwell小室检测迁移能力的变化；Transwell小室结合Matrix胶检测侵袭能力的变化；Western Blot实验检测Paxillin蛋白表达水平的变化。 研究结论： 1.外源性PGE2可明显增加肝细胞癌Huh7细胞的黏附、迁移及侵袭能力。 2.外源性PGE2可显著促进肝细胞癌Huh7细胞及Hep3B细胞FAK、Paxillin、Erk2的蛋白磷酸化，同时也促进相关蛋白表达水平的增加，从而激活FAK/Paxillin/Erk信号转导通路。 3.EGFR通路可能参与了PGE2诱导的肿瘤细胞侵袭及肿瘤转移过程中的信号转导。 4.PGE2可激活FAK/Paxilli/Erk信号转导通路，进而激活MAPK信号转导通路，促进肿瘤细胞的转移。

目录

声明

前言

材料与方法

实验结果

分析与讨论

研究小结

参考文献

致谢

综述 黏着斑激酶及相关信号转导通路