东亚钳蝎毒素活性多肽对大鼠背根神经节神经元钠离子通道的作用研究

摘要

一、东亚钳蝎毒素活性多肽的分离纯化及性质鉴定运用经典色谱法对东亚钳蝎(Buthus martensi Karsch，BmK)蝎毒素多肽进行了分离和纯化，得到了BmK2255多肽单体。运用Edman降解法测序，得到了BmK2255的全长序列为VRDGYIADDK NCAYFCGRNA YCDEE CLING AESGY CQQAG VYGNA CWCYK LPDKVPIRVS GECQQ；通过ESI-MS测定，BmK2255的分子量为7223 Da；根据BmK2255的测序结果，通过检索和氨基酸序列比对发现，BmK2255与已发现的Bukatoxin的氨基酸序列一致。 二、东亚钳蝎毒素多肽Bukatoxin对大鼠背根神经节神经元TTX-R钠离子通道的作用采用膜片钳全细胞记录技术，观察了东亚钳蝎毒素多肽Bukatoxin对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion，DRG)神经元TTX-R钠离子通道的作用。结果表明：(1)20、40、80μg/ml的Bukatoxin对TTX-R钠离子通道电流峰值的抑制率分别为(18.72±1.27)％、(27.40±4.97)％和(59.02±4.71)％(n=4，P<0.05)。半数抑制浓度(IC50)为66.28 μg/ml，Hill系数(h)为1.48；(2)对TTX-R钠离子通道激活和失活动力学分析表明：Bukatoxin可以电压依赖性地影响TTX-R钠离子通道激活和失活过程，使TTX-R钠离子通道激活向去极化方向略有移动，失活向超极化方向移动6 mV，使TTX-R钠离子通道开放时间明显缩短，从而引起TTX-R钠离子通道电流的降低。 三、东亚钳蝎毒素多肽Bukatoxin对大鼠背根神经节神经元TTX-S钠离子通道的作用采用膜片钳全细胞记录技术，观察了东亚钳蝎毒素多肽Bukatoxin对大鼠DRG神经元TTX-S钠离子通道的作用。结果表明： (1)20、40、80μg/ml的Bukatoxin能分别使TTX-S钠离子通道电流的峰值增大(3.90±1.44)％、(10.10±3.56)％和(30.98±1.98)％(n=6，P<0.05)。半数有效浓度(EC50)为105.52μg/ml，Hill系数(h)为1.48；(2)对TTX-S钠离子通道激活和失活动力学分析表明：Bukatoxin可以电压依赖性地影响TTX-S钠离子通道激活和失活过程，使TTX-S钠离子通道激活向超极化方向移动9 mV，失活向去极化方向移动10 mV，使TTX-S钠离子通道开放时间明显延长，从而引起TTX-S钠离子通道电流的增大。Bukatoxin能够明显延缓TTX-S钠离子通道的失活。

目录

声明

摘要

引 言

研究背景综述

一、电压门控钠离子通道的研究进展

二、蝎神经毒素的研究进展

第一部分东亚钳蝎毒素的分离纯化及性质鉴定

第二部分东亚钳蝎毒素对大鼠背根神经节神经元钠离子通道的作用

一、Bukatoxin对大鼠DRG神经元TTX-R钠离子通道的作用

二、Bukatoxin对大鼠DRG神经元TTX-S钠离子通道的作用

小 结

参考文献

致谢