生物样品中氨基酸类活性物质的检测方法及应用研究

摘要

氨基酸类神经递质在机体生理活动的调节中起着重要的作用。本文主要针对氨基酸类活性物质的检测方法展开研究，利用所制备的新型纳米纤维材料对人体唾液中氨基酸类神经递质进行了固相萃取，建立了氨基酸多指标检测方法，并将新方法应用于测定人体应激状态下唾液中氨基酸类神经递质的含量变化情况，筛选潜在的新的唾液中应激标志物。
　　本文主要开展了以下四个方面的研究工作:
　　(1)制备了以聚苯乙烯为模板原位聚合PEDOT纳米纤维，建立了基于PEDOT纳米纤维为吸附剂的固相萃取-高效液相电化学检测法检测唾液中氨基酸的方法;
　　(2)建立了丹磺酰氯柱前衍生-高效液相色谱法测定唾液中的23种氨基酸的基本方法;
　　(3)建立了基于PEDOT纳米纤维为吸附剂的固相萃取-高效液相紫外检测法检测唾液中氨基酸的方法;
　　(4)开展了唾液中氨基酸的检测在人体应激实验方面的初步应用研究。论文主要工作如下:
　　一、制备PEDOT(PS-EDOT)纳米纤维，建立纳米纤维固相萃取-邻苯二甲醛柱前衍生-高效液相色谱-电化学检测法测定唾液中氨基酸的方法
　　采用静电纺丝技术得到PS纳米纤维，以PS纤维为模板原位聚合制备聚3，4-乙烯二氧噻吩(PEDOT)纳米纤维，并以此作为固相萃取吸附剂，用PEDOT纳米纤维作为吸附剂，邻苯二甲醛作为衍生剂，结合高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)建立了唾液中氨基酸的提取及检测方法。该方法能成功地分离18种氨基酸。采用所建立的方法能够测得唾液中的15种氨基酸，并考察了温度、衍生剂中盐的用量、洗脱液的酸性等影响提取条件的因素。该方法操作简便易行，具有较高的灵敏度和重现性，且唾液中杂质的干扰较低。
　　二、丹磺酰氯柱前衍生-高效液相色谱-紫外检测法测定唾液中的氨基酸
　　建立了唾液中氨基酸的柱前衍生高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)分析方法。通过色谱条件的优化，成功地分离了23种氨基酸。唾液经离心后，取上清液加入衍生剂衍生，注入高效液相色谱分析。采用所建立的方法能够测得唾液中的20种氨基酸。该方法衍生产物稳定，操作快速简便，且高效。能够用于唾液中氨基酸的含量的测定。
　　三、建立基于PEDOT纤维为吸附剂的固相萃取-高效液相-紫外检测法检测唾液中氨基酸的方法
　　用PEDOT纳米纤维作为吸附剂，丹酰氯作为衍生剂，结合高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)建立了唾液中氨基酸的提取及检测方法。另外，通过对一些提取的影响因素，如样品溶液的pH值、纤维装量、柱形、EDOT的用量等的考察，进一步提高了该方法的可靠性及适用性。该方法操作简便、快速，具有较高的重现性。
　　四、唾液中氨基酸检测在人群应激实验方面的初步应用研究
　　本文采用以上所建立的方法，设计了3个应激性试验，分别测定了人体在应激状态前，应激状态后，休息20分钟后唾液中氨基酸的变化情况，并且对该情况进行了总结归纳，发现某些特定的氨基酸在应激前，应激后，休息一段时间后其浓度发生明显变化，表现出应激标志物的特征。

目录

声明

摘要

主要缩写词表

第一章 绪论

1．1 氨基酸类神经递质简介

1．2 氨基酸常用分析和检测方法

1．2．1 化学法

1．2．2 分光光度法

1．2．3 电化学法

1．2．4 色谱法

1．2．5 高效液相色谱法

1．3 本课题中的24种氨基酸

1．4 文献中报导的唾液中氨基酸的含量

1．5 应激

1．5．1 应激概念

1．5．2 应激反应的评估方法

第二章 纳米纤维固相萃取-高效液相色谱(电化学检测)法测定唾液中的氨基酸

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 仪器

2．2．2 试剂

2．2．3 方法

2．3 结果与讨论

2．3．1 色谱图

2．3．2 实验条件优化

2．3．3 强保留系统中八种氨基酸测定方法学考察

2．4 结论

第三章 唾液中氨基酸丹酰氯衍生-高效液相色谱测定方法的建立

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器

3．2．2 试剂

3．2．3 方法

3．3 结果与讨论

3．3．1 色谱图

3．3．2 线性关系的考察

3．3．3 样品中氨基酸的含量

3．3．4 精密度和加标回收率的测定

3．4 结论

第四章 纳米纤维固相萃取-高效液相色谱法(紫外检测法)测定唾液中的氨基酸

4．1 引言

4．2 实验部分

4．2．1 仪器

4．2．2 试剂

4．2．3 方法

4．3 结果与讨论

4．3．1 谱条件的优化

4．3．2 衍生条件优化

4．3．3 材料的选择

4．3．4 样品介质酸碱性对提取效率影响考察

4．3．5 不同柱形对氨基酸提取效率的影响

4．3．6 固相萃取柱不同装量对氨基酸提取效率的影响

4．3．7 柱子再生性考察

4．3．8 EDOT的含量对氨基酸提取效率的影响

4．3．9 方法学考察

4．4 结论

第五章 唾液中氨基酸检测在人群应激实验方面的应用

5．1 引言

5．2 3D视觉刺激试验

5．2．1 实验简介

5．2．2 被试对象

5．2．3 实验结果及分析

5．3 STROOP试验

5．3．1 实验简介

5．3．2 被试对象

5．3．3 实验结果分析

5．4 冰水刺激试验

5．4．1 实验简介

5．4．2 被试对象

5．4．3 实验结果分析

5．5 结论

参考文献

致谢

作者简介