晚期糖基化终产物受体特异性小干扰RNA对致炎因子生成的抑制作用

摘要

目的：探讨晚期糖基化终产物受体(the receptor of advanced glycation endproducts，RAGE)特异性小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)在原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSCs）中及肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)大鼠体内对致炎因子生成的影响。
　　方法：构建RAGE特异性siRNA表达载体pAKD-GR126，将其转染入原代大鼠HSCs，以空白组和转染非特异性siRNA表达载体pAKD-NC组为对照，分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组原代HSCs中RAGE、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6) mRNA及蛋白的表达;制备CCl4诱导的SD大鼠HF模型，将pAKD-GR126经尾静脉注射导入SD大鼠体内，以正常对照组、模型组和pAKD-NC组为对照，应用荧光显微镜观察大鼠肝组织内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)示踪的pAKD-GR126和pAKD-NC的表达，应用放射免疫法检测各组实验大鼠血清中TNF-α和IL-6的浓度。
　　结果：转染pAKD-GR126的原代HSCs的RAGE mRNA和蛋白的表达水平分别下调为空白组和pAKD-NC组的（42.32±6.16）％、（43.24±7.50）％和(51.06±13.79)％、（47.94±5.36)％(F=7.791,36.513;P均＜0.05);TNF-α mRNA和蛋白的表达水平分别下调为空白组和pAKD-NC组的（38.68±4.11）％、(39.50±3.29)％和（57.00±6.07）％、（56.01±5.27）％(F=474.568，123.500;P均＜0.05);IL-6 mRNA和蛋白的表达水平分别下调为空白组和pAKD-NC组的（47.46±5.52）％、(45.94±4.55)％和（48.30±3.26）％、（50.50±3.61）％(F=203.463，320.555;P均＜0.05）。用RAGE特异性siRNA干预HF大鼠6 w后，各治疗组及NS组的肝脏切片在荧光显微镜下均能见到示踪的GFP阳性绿色荧光;pAKD-GR126小剂量治疗组、pAKD-GR126中剂量治疗组和pAKD-GR126高剂量治疗组的血清TNF-α、IL-6水平分别降至HF模型组的（76.68±1.83）％、（69.00±2.36）％、（62.29±2.44）％和（81.23±1.38）％、(65.32±2.03)％、(48.87±1.13)％(F=416.397,1716.659;P均＜0.05)。
　　结论： RAGE特异性siRNA在原代大鼠HSCs及HF大鼠体内均能有效抑制致炎因子TNF-α和IL-6的生成。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

文献综述 致炎因子与肝纤维化

1．HF及其病理特征

2．HSCs与HF

3．TNF-α

4．IL-6

5．总结

第一部分 材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析

第二部分 实验结果

1．RAGE特异性siRNA对原代HSCs RAGE、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响

2．RAGE特异性siRNA对原代HSCs RAGE、TNF-α、IL-6蛋白表达的影响

3．大鼠肝脏中GFP的表达

4．RAGE特异性siRNA对HF大鼠血清中TNF-α、IL-6浓度的影响

第三部分 讨论

第四部分 结论

致谢

参考文献

作者简介