不同免疫状态鲍曼不动杆菌肺炎小鼠中cDCs的变化及意义

摘要

背景:鲍曼不动杆菌目前已成为重症医学科院内获得性肺炎的重要机会致病菌，毒力较低，免疫力低下的重症患者是感染的高危人群。鲍曼不动杆菌感染时机体产生一系列复杂的抗感染免疫应答，感染的严重程度可能与机体的免疫状态及免疫应答水平相关，然而目前缺少免疫病理生理研究。常规树突状细胞(Conventional Dendritic Cells，cDCs)作为肺免疫网络的前哨细胞和中心组分，在抗感染免疫应答过程中起到重要作用，cDCs参与的免疫应答可能与鲍曼不动杆菌肺部感染的结局有关。
　　目的:探讨不同免疫状态鲍曼不动杆菌肺炎小鼠中cDCs的变化与意义。
　　方法:BALB/c小鼠随机分为免疫力正常空白对照组、免疫力正常感染组、免疫力低下空白对照组、免疫力低下感染组。接种鲍曼不动杆菌前4d及前1d腹腔注射环磷酰胺降低动物免疫力，以血中性粒细胞计数小于200×106/L作为免疫力低下的标准。50μL含108 CFU/mL鲍曼不动杆菌菌液滴鼻复制鲍曼不动杆菌肺炎小鼠模型，接种鲍曼不动杆菌6h、24h分别断头处死小鼠，留取肺组织，采用流式细胞术检测评价肺cDCs的数量及成熟程度，ELISA检测肺组织IFN-γ及IL-4炎症因子水平反映炎症反应程度，计算肺湿干重比评价肺水肿程度，肺组织HE染色行组织病理学检查，以炎症细胞浸润、间质水肿、出血坏死、肺泡腔结构破坏作为肺炎模型成功的标准，Smith评分反映肺损伤程度。
　　结果:(1)免疫力低下及肺炎小鼠模型建立:免疫力正常空白对照组及免疫力正常感染组6h、24h基础血中性粒细胞计数均高于200×106/L，免疫力低下空白对照组及免疫力低下感染组6h、24h基础血中性粒细胞计数均低于200×106/L，提示免疫力低下小鼠模型建立成功;免疫力正常感染组及免疫力低下感染组6h、24h肺组织病理均可见不同程度炎症细胞浸润、间质水肿、出血坏死及肺泡腔结构破坏，反映肺炎小鼠模型复制成功。(2)不同免疫状态鲍曼不动杆菌肺炎小鼠中肺cDCs数量及成熟程度:与免疫力正常空白对照组6h相比，免疫力正常感染组6h肺cDCs占肺单个核细胞的比例[（1.64％±0.27％）vs.（0.58％±0.12％），P＜0.05]及cDCs表达MHCⅡ占肺单个核细胞的比例[（60.68％±19.34％）vs.（41.06％±13.29％），P＜0.05]均显著增高;免疫力低下空白对照组6h肺cDCs占肺单个核细胞的比例[（0.32％±0.18％）vs.（0.58％±0.12％），P＜0.05]明显降低;与免疫力低下空白对照组6h相比，免疫力低下感染组6h肺cDCs占肺单个核细胞的比例[（0.22％±0.09％）vs.（0.32％±0.18％），P=0.04]明显减少，cDCs表达MHCⅡ占肺单个核细胞的比例[(44.20％±13.16％) vs.(47.84％±13.78％)，P=0.70]未见明显增加。与免疫力正常空白对照组24h相比，免疫力正常感染组24h肺cDCs占肺单个核细胞的比例[（1.67％±0.36％）vs.（0.61％±0.07％），P＜0.05]明显增加，cDCs表达MHCⅡ占肺单个核细胞的比例[（72.24％±16.15％）vs.（57.74％±12.02％），P=0.79]无差异;与免疫力低下空白对照组24h相比，免疫力低下感染组24h肺cDCs占肺单个核细胞的比例[（0.52％±0.24％）vs.（0.46％±0.09％），P=0.66]无差异，cDCs表达MHCⅡ占肺单个核细胞的比例[(63.08±13.11) vs.(71.60±16.41)，P=0.34]呈下降趋势。(3)不同免疫状态鲍曼不动杆菌肺炎小鼠中肺组织炎症因子水平:免疫力正常及免疫力低下感染组6h、24h肺组织IFN-γ及IL-4分别较免疫力正常、免疫力低下空白对照组高(P＜0.05)，提示免疫力正常及免疫力低下感染组均存在免疫炎症反应;与免疫力正常感染组相比，免疫力低下感染组6h、24h肺组织IFN-γ水平[(17.95±2.40)ng/mL vs.(22.83±1.28)ng/mL、(14.67±2.27)ng/mL vs.(20.79±0.94)ng/mL]及IL-4水平[(295.36±17.49)pg/mL vs.(332.68±14.63)pg/mL、(251.03±10.28)pg/mL vs.(321.96±14.16)pg/mL]均显著减少(P均＜0.05)，反映免疫力正常感染组炎症因子水平较免疫力低下感染组高。(4)不同免疫状态鲍曼不动杆菌肺炎小鼠中肺水肿程度及Smith评分:免疫力正常及免疫力低下感染组6h、24h肺组织湿干重比分别较免疫力正常、免疫力低下空白对照组高(P均＜0.05），免疫力正常感染组及免疫力低下感染组24h Smith评分[(5.02±0.70) vs.(2.66±0.15)、(8.08±0.55) vs.(2.80±0.24)]分别较免疫力正常、免疫力低下空白对照组高(P均＜0.05），提示免疫力正常感染组及免疫力低下感染组均存在不同程度肺损伤;与免疫力正常感染组24h相比，免疫力低下感染组24h肺组织湿干重比[（6.25±0.54）vs.（5.18±0.37），P＜0.05]及肺损伤评分[(8.08±0.55) vs.(5.02±0.70)，P＜0.05]均显著增加，反映免疫力低下感染组肺损伤程度较重。
　　结论:免疫力正常小鼠感染鲍曼不动杆菌后肺大量成熟cDCs聚集，肺损伤较轻;免疫力低下小鼠肺cDCs数量较少，感染鲍曼不动杆菌后肺cDCs数量及成熟增加不明显，肺损伤程度较重。

目录

声明

摘要

缩略词表(Abbreviation)

前言

文献综述 鲍曼不动杆菌感染免疫应答机制研究进展

主要实验仪器与试剂

1 研究对象和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

小结

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