基因多态性与胸心外科相关疾病易感性的关联研究

摘要

本研究采用病例对照研究方法，对VEGF、NFATcl等基因的功能性SNPs单独或联合与先天性心脏病遗传易感性的关系进行研究，以研究先天性心脏病的发病机制和发现与我国人群先天性心脏病相关的危险基因型，并将其作为分子标志物用于筛选高危人群或易感个体从而为实施目标明确的个体预防等方面具有重要的理论和实践意义。 1.血管内皮生长因子(VEGF)与先天性心脏病发病风险的病例对照研究采用以医院为基础的病例对照研究，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase Chain Reaction-Restriction FragmentLength Polymorphism，PCR-RFLP)的方法检测VEGF基因型；使用酶联免疫吸附试验enzyme linked immu-nosorbcnt assay(ELISA)方法，检测病例组和对照组血浆中VEGF水平，结果显示，先天性心脏病患者的血浆VEGF平均水平为252.85(±200.88)ng/L，显著高于对照组的平均水平21 1.32(±206，97)ngm(P=0.024)。同时按照先天性心脏病并发症如紫绀型心脏病和先天性心脏病肺动脉高压进行分类，发现血浆VEGF平均水平在肺动脉高压患者中273.12(+233.57)ngL和43例紫绀型心脏病患者314.70(+_291.75)ng/L大于288例对照中211.32(±206.97)ng/L，P=0.020和P=0.030，而血浆平均VEGF水平在其它92例先天性心脏病和288例非先心对照中的差异并不明显(p=0.61 1)，同时我们比较了病例和对照中不同基因型组血浆VEGF水平，在四个不同位点中血浆VEGF水平未发现明显差别。 2.活化T细胞的核因子(NATcl)基因多态性与先天性心脏病膜周部室间隔缺损遗传易感性的病例对照研究活化T细胞的核因子(NATcl)在瓣膜和间隔发育中起重要作用，NFATcl的多态性改变可能引起NFATcl表达的差异，因此有可能与间隔缺损或瓣膜缺损有关，本病例对照研究采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)的方法检测NFATcl短重复序列S/L基因型，采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性(PolymeraseChain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)的方法检测NFATcl Cys751Gly基因型，共检测了膜周部室间隔缺损病例217名和非先心对照557名，运用Logistic回归模型分析NFATcl基因型与先天性心脏病膜周部室间隔缺损发生危险因素的关系 3.ETlTaql多态性与先天性心脏病易感性关系的研究内皮素1(Etl)是由内皮和平滑肌细胞产生的强大的血管收缩肽，在不同的组织内均发现存在Etl，可能与血管收缩调节、细胞增殖等有关，而研究发现，Etl和其G蛋白耦联的受体在正常胚胎发育过程中起重要作用，与神经嵴细胞的发生有关，因此有可能与先天性心脏病的易感性有关。Etl是由EDNl基因编码的，其中Etl Taql多态性为内含子4的8000位点T/C的转换，可能引起Etl表达的差异，因此可能与先天性心脏病的易感性有关，本病例对照研究采用聚合酶链反应.限制性片段长度多态性(Polymerase ChainReaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)的方法，检测了Etl Taql基因型与先天性心脏病膜周部室间隔缺损发生危险因素的关系，共检测了膜周部室间隔缺损病例217名和非先心对照557名，Logistic回归分析表明与Etl Taql，TT基因型相比，携带Etl Taql CC等位基因显著降低先天性心脏病膜周部室间隔缺损发病危险(CC基因型的调整OR=0.43，95％CI=0.20-0.94). 4.亚甲基四氢叶酸还原酶基因MTHFR及相关基因多态性与先天性心脏病易感性关系的研究母亲高同型半胱氨酸血症可导致后代先天性心脏病发生的危险性增加，补充叶酸能降低血浆同型半胱氨酸水平，减少先天性心脏病的发病风险。MTHFR是叶酸代谢通路中一种重要的酶，研究发现MTHER基因C677T多态与MTHFR酶的活性有明显关系，MTHFRC677T多态性改变可导致其编码的代谢酶热稳定性降低，从而影响叶酸-同型半胱氨酸代谢，与先天性心脏病的危险因素有关.研究发现，MTHFRC667T基因多态性与先天畸形有关，胎儿携带MTHFR667TT基因型增加胎)L2.9倍的神经管畸形发生率，同时胎儿MTHER C677T基因多态性和先天性心脏病发病风险有关，胎儿携带TT基因型与肺动脉瓣狭窄，左心发育不良综合症，主动脉狭窄，主动脉瓣狭窄和主动脉瓣下狭窄的危险因素有关.同时，叶酸通路的其它多态性位点如MTHFR A1298C、MTHFR G1793A、MTHFD T401C、MTHFD G1958A可能与胎儿叶酸代谢有关，与先天性心脏病的危险因素有关。 第二部分基因多态性与肺癌易感性关系的病例对照 【目的】研究细胞周期调控相关基因TP53 rS1042522、p27 rs7330、p21 rSl801270、CHK2 rs2236141等多态性位点在中国人群肺癌患者及健康对照中的分布，以研究各基因型与肺癌易感性的关系。 【方法】以医院为基础的病例对照研究方法；选择经组织学确诊的500例新发肺癌病例及性别、年龄和地区频数匹配的517例人群对照；通过Illumina的方法检测包含TP53 rsl042522、p27 rs7330、p21rsl801270、CHK2 rs2236141共9个基因12个位点的基因型。用多元logistic回归模型计算各不同基因型人群患肺癌的风险(OR)及其95％可信区间(95％CI)。 【结果】 1、各位点基因型在肺癌病例组与对照组中的分布TP53 rs1042522、p27 rs7330、p21rsl801270、p15 rs3088440、CHK2rs2236142、CCNBl rsl64390,CCND3 rs9529、CDC25A rs3731485、CDC25B rs3761218、CDC25B rs61 16042、CDC25B rs3761220共1 1个位点的各基因型在病例组和对照组中的分布无显著性差异。CHK2rs2236141的三种基因型频率在病例组中分别为71.8％(GG)，26.0％(GT)和2.2％(TT)，而在对照组中分别为65.9％(GG)。33.7％(GT)和3.5％(TT)，两组存在显著性差异(P=0.009)。 2、多因素Logistic回归分析在调整了性别、年龄和吸烟等因素和肿瘤家族史后，与携带CHK2 rs2236141 GG基因型者比较，携带CHK2 rs2236141 GT基因型者患肺癌的风险显著减少了36％(校正OR=0.64，95％CI=0.48-0.84)，而携带CHK2 rs2236141 TT基因型者患肺癌的风险则减少了54％(校正0R=0.46，95％CI=0.21-1.02).而携带CHK2rs2236141删联合基因型者患肺癌的风险则减少了38％(校正OR=0.62，95％CI-0.47-0.81).但CHK2基因rs2236142位点的多态性与肺癌的患病风险无显著性关联。 3、分层分析 以年龄、性别、吸烟史、肿瘤家族史及病理类型对CHK2rs2236141多态性位点与肺癌的关联进行分层分析。与携带CHK2rs2236141 GG基因型者比较，在年龄>60岁的人群中、携带CHK2rs2236141GT/TT合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.48倍(95％CI=0.35-0.78)；在年龄<60岁的人群中、携带CHK2 rs2236141GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少O.27倍(95％CI=0.50-1.06)；在男性中、携带CHK2 rs2236141 GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.28倍(95％CI=0.53-0.97)；在女性中、携带CHK2 rs2236141 GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.67倍(95％CI=0.16-0.67)；在无吸烟史人群中、携带CHK2rs2236141 GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.46倍(95％CI=0.53.0.86)；在有吸烟史人群中、携带CHK2 rs2236141GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.36倍(95％CI=0.45-0.91)；在无肿瘤家族史人群中、携带CHK2 rs2236141 GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.30倍(95％CI=0.51-0.95)：在有肿瘤家族史人群中、携带CHK2 rs2236141 GTTT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少0.57倍(95％CI=0.23-0.81)；病理类型的分层发现在腺癌和鳞癌中、携带CHK2 rs2236141 GT/TT联合基因型可以使其患肺癌的风险减少，分别是腺癌减少0.45倍(95％CI=0.38-0.78)、鳞癌减少O.48倍(95％CI=0.33-0.81). 【结论】CHK2基因的多态性rs2236141位点可能与中国汉族人群肺癌遗传易感性有关，有必要进一步进行功能研究的验证。

目录

声明

第一部分基因多态性与先天性心脏病易感性的关联研究

摘要

序言

1.VEGF基因多态性与先天性心脏病发病危险因素的关系

前言

材料与方法

结果

讨论

2.NFATc1基因多态性与先天性心脏病膜周部室间隔缺损发病危险因素的关系

前言

材料与方法

结果

讨论

3.ET1 Tap1基因多态性与先天性心脏病膜周部室间隔缺损发病危险因素的关系

前言

结果

讨论

4.亚甲基四氢叶酸还原酶基因NTHFR及相关基因多态性与先天性心脏病易感性关系的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分基因多态性与肺癌易感性的病例对照研究

【中文摘要】

1.细胞周期调控相关基因的多态性与肺癌易感性关系的分子流行病学研究

摘要

前言

对象与方法

结果

讨论

2.肿瘤抑制基因（TP53）基因的多态性与肺癌易感性关系的分子流行病学研究

摘要

引言

对象与方法

结果

讨论

3.MBD4基因多态与肺癌易感性的病例-对照研究

摘要

引言

对象与方法

结果

讨论

小结

参考文献

附录一 主要缩略词中英文对照

附录二 已发表论著

发表论文1

发表论文2

发表论文3

发表论文4

致谢