The Effect of Neovascularization on Human Retinal Pigment Epithelium after Hyperbaric Oxygen Therapy

摘要

目的：
　　通过体外培养人视网膜色素上皮细胞，观察高压氧(Hyperbaric oxygen，HBO)治疗对正常和缺氧状态视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment epithelium，RPE)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。
　　方法：
　　体外培养人视网膜色素上皮细胞ARPE-19，随机分成对照组（正常对照组用DMEM/F12培养液，缺氧对照组用含浓度为200μmol/L CoC12的DMEM/F12培养液）和实验组（0.15MPa高压氧处理组，0.2MPa高压氧处理组，0.25MPa高压氧处理组，缺氧+0.15MPa高压氧处理组，缺氧+0.2MPa高压氧处理组，缺氧+0.25MPa高压氧处理组）。各实验组100％纯氧下暴露60和90min，每隔24h暴露一次，共暴露2次.以蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中的PEDF及TNF-α表达情况。
　　结果：
　　Western Blot法显示:①缺氧组与正常组在HBO干预后(0.15MPa组、0.20MPa组、0.25MPa组在所有观察时间(60min、90min))，细胞内PEDF表达量增加(P＜0.01)，正常组的表达量与缺氧组相比明显较高，各组PEDF表达量与HBO干预时间无统计意义;②正常组与缺氧组在HBO干预后（0.15MPa组、0.20MPa组、0.25MPa组在所有观察时间（60min、90min）），细胞内TNF-α表达量均减少(P＜0.01)，缺氧组的表达量与正常组相比明显较高，各组TNF-α表达量与HBO干预时间无统计意义。
　　结论：
　　1)高压氧治疗可以促进正常状态以及缺氧状态下RPE细胞释放PEDF;
　　2)高压氧治疗会抑制正常状态以及缺氧状态下RPE细胞释放TNF-α，这种抑制作用在缺氧状态下更为显著;
　　3)高压氧治疗可以升高PEDF水平，降低TNF-α水平，具有抗血管生成作用，从而可以抑制新生血管生成。

目录

声明

Abstract

摘要

Abbreviation

Contents

Preface

Literature Review

Material and Methods

1．1 Experimental material

1．1．1 Object of Study

1．1．2 Material，reagent and preparation

1．1．3 Laboratory Instrument and equipments

1．2 Experimental procedures

1．2．1 Expperimental procedures

1．2．2 HBO exposure metho d

1．2．3 DMEM/F12 broth preparation

1．2．4 ARPE-19 Cellline culture

1．2．5 Bicinchoninic acid assay(BCA assay)

1．2．6 Somum Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis(SDS PAGE)

1．2．7 Western blot

1．2．8 Statistical Analysis

Result

2．1 The changes in the PEDF expression after ARPE-19 cells had under gone HBO intervention for normoxic condition and hypoxic condition

2．2 The changes in the TNF-α expression after ARPE-19 cells had under gone HBO interven for normoxic condition and hypoxic condition．

Discussion

Onclusio n

Reference

AUTHOR’S PROFILE

ACKNOWLEDGMENTS