篦齿虎耳草化学成分及酪氨酸酶抑制活性研究

摘要

酪氨酸酶抑制剂的研究是当今美白化妆品研发的热点，从植物、微生物等天然来源资源寻找具有良好酪氨酸酶抑制活性的化合物具有重要意义。篦齿虎耳草(Saxifragaumbellulata var.pectinata)产自我国西藏东部，药理实验初步表明该植物提取物具有抗菌作用，以及与Vc相当的抗氧化作用。为深入了解篦齿虎耳草的化学成分及其在美白方面的潜在应用，本文以酪氨酸酶抑制剂活性为导向，重点研究了篦齿虎耳草提取物活性部位的化学成分，并对分离得到的主要黄酮类化合物开展了酪氨酸酶抑制剂活性的研究。
　　考察了篦齿虎耳草乙醇、氯仿、丙酮三种提取溶剂粗提物对酪氨酸酶抑制活性的影响，三种溶剂提取均有较好的抑制活性，IC50分别为1∶1052.6、1∶499.8和1∶564.3(v/v)，提取效果乙醇＞丙酮＞氯仿。其中乙醇的粗提物最大抑制率达到84.94％。
　　以乙醇为总提取溶剂，对篦齿虎耳草进行了有效成分的提取。探讨了乙醇提取物不同溶剂萃取物的酪氨酸酶抑制剂活性，研究表明乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部活性最好，IC50分别为1∶882.6和1∶624.6(v/v)，最大抑制率分别达到96.63％和87.17％。
　　采用硅胶柱层析等多种分离纯化手段，从篦齿虎耳草的乙醇粗提物的乙酸乙酯部和正丁醇萃取部得到26个化合物，根据其理化性质及NMR等波谱技术鉴定了其中24个化合物的结构，分别为豆甾醇(B1)、β-谷甾醇(B2)、胡萝卜苷(B3)、moscatin(B4)、没食子酸(B5)、4-乙基没食子酸(B6)、咖啡酸二十烷酯(B7)、pedicularioside G(B8)、1，3，7，8-四羟基口山酮(B10)、1-羟基-3，7，8-三甲氧基口山酮(B11)、1，8-二羟基-3，5-(山)酮(B12)、5，7，3'，4'-四羟基-6，5'-二甲氧基黄酮(B13)、5，7,2'，4'-四羟基-5'-甲氧基黄酮(B14)、5，2',4'-三羟基-6，7，5'-三甲氧基黄酮(B15)、槲皮素(B16)、槲皮素-4'-O-β-D-半乳糖苷(B17)、槲皮素-4'-O-D-葡萄糖苷(B18)、芦丁(B19)、山奈酚(B20)、金圣草素(B21)、β-香树脂醇(B23)、齐墩果酸(B24)、β-香树脂醇乙酸酯(B25)和乌发醇(B26)。其中，19个化合物B1、B4、B5、B6、B7、B8、B10、B11、B12、B13、B14、B17、B18、B20、B21、B23、B24、B25、B26为首次从该植物中分离得到。
　　重点研究了从篦齿虎耳草分离得到的6个黄酮类化合物B10、B11、B13、B14、B15和B16对酪氨酸酶的抑制作用，发现其对酪氨酸酶均有一定的抑制活性并呈浓度依赖性，IC50分别为461.22，621.94，170.52，145.23，338.87和41.37μg/mL，其中槲皮素(B16)的抑制活性强于阳性对照药熊果苷(IC5059.48μg/mL)。
　　本研究论文的结果，丰富了篦齿虎耳草的化学成分研究的范畴，为该药用资源的深入开发提供了理论基础。

目录

声明

摘要

缩略语一览

第一章 绪论

1．1 酪氨酸酶

1．1．1 黑色素生成

1．1．2 酪氨酸酶

1．1．3 酪氨酸酶结构

1．1．4 酪氨酸酶生物活性

1．2 酪氨酸酶抑制剂

1．2．1 广泛使用的酪氨酸酶抑制剂

1．2．2 天然酪氨酸酶抑制剂筛选

1．3 虎耳草属研究概述

1．3．1 虎耳草属植物的化学成分

1．3．2 虎耳草属植物的药理活性

1．4 立题依据及选题意义

1．5 主要研究内容

第二章 篦齿虎耳草酪氨酸酶抑制活性成分的提取

2．1 实验设备及材料

2．1．1 药材

2．1．2 仪器及试剂

2．2 酪氨酸酶活性的测定

2．2．1 实验原理

2．2．2 试剂配制

2．2．3 酪氨酸酶活性抑制率的测定方法

2．3 提取溶剂对篦齿虎耳草酪氨酸酶抑制活性成分提取的影响

2．3．1 提取方法

2．3．2 结果与讨论

2．4 篦齿虎耳草乙醇粗提物不同萃取部分活性比较

2．4．1 萃取过程

2．4．2 结果与讨论

2．5 本章小结

第三章 篦齿虎耳草的化学成分研究

3．1 实验部分

3．1．1 药材

3．1．2 仪器及化学试剂

3．1．3 化合物的提取与分离

3．2 结果与讨论

3．2．1 化学成分及化合物结构

3．2．2 化合物的结构鉴定

3．3 黄酮类化合物对酪氨酸酶的抑制作用

3．4 化合物的物理常数及光谱数据

3．5 本章小结

第四章 总结与展望

4．1 总结

4．2 展望

参考文献

附录

硕士学位期间主要成果

致谢