Survivin抑制剂YM155对乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬影响的探讨

摘要

目的：研究生存素(survivin)抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡效应及其可能的作用机制。
　　方法：采用CCK-8法实验检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响，计算其24、48 h半数抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration，IC50);流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测各加药组与对照组间细胞的survivin和bcl-2的mRNA的表达量;蛋白质印迹法检测survivin、bcl-2、caspase-3、PARP蛋白表达变化情况。
　　结果：YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测显示YM155在0.5、1.0、1.5 ng/ml浓度对细胞的凋亡率分别是11.9±2.4％、21.7±2.6％、30.8±4.5％，与对照组(6.4±1.2％)相比具有统计学意义(P＜0.01)。当使用自噬抑制剂3-MA(5mM)联合处理细胞24h后细胞增殖率(62.5±3.3％)，与单用YM155组(54.7±2.7％)相比，细胞增殖活性增强(P＜0.05)。YM155可显著下调surviivn的mRNA和蛋白表达，降低bcl-2和提高活化caspase-3、PARP的蛋白表达，同时上调beclin1表达及增加LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的比值，促进了细胞自噬的发生。
　　结论：YM155能够有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬的发生，其诱导的自噬效应进一步促进其凋亡的发生。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 细胞株

2 主要试剂与耗材

3 主要仪器与设备

二 试验方法

(一)细胞培养

(二)CCK-8法检测细胞增殖

(三)Annexin V-FITC检测药物作用前后的细胞凋亡率

(四)Western Blotting检测蛋白表达

(五)Real time PCR法检测基因表达

(六)数据统计分析

结果

1．YM155抑制MDA-MB-231的增殖

2．YM155促进MDA-MB-231细胞凋亡

3．自噬促进了YM155抑制MDA-MB-231的增殖作用

4．自噬促进了YM155对MDA-MB-231的凋亡作用

5．YM155对各基因mRNA表达的影响

6． YM155对各蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

综述

中英文缩写

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致谢