结肠癌转移相关基因1对食管癌细胞增殖和迁移的作用及其机制研究

摘要

目的:
　　研究结肠癌转移相关基因1(Metastasis Associated In Colon Cancer1，MACC1)对食管癌细胞增殖和迁移的作用及可能的机制。
　　方法:
　　1.采用RT-PCR及Western blot检测不同食管癌细胞株EC109、EC9706、TE13、EC1和正常食管上皮细胞株HEEpiC中MACC1的表达，选取低表达MACC1的细胞株TE13和高表达MACC1的细胞株EC109进行后续实验。
　　2.构建携带MACC1的腺病毒载体Ad-MACC1和MACC1 siRNA，Ad-MACC1感染TE13细胞，增加MACC1的表达，MACC1 siRNA转染EC109食管癌细胞，降低MACC1的表达，通过Western blot检测感染或转染效果。
　　3.Ad-MACC1和MACC1 siRNA分别处理TE13和EC109细胞后，通过MTT实验检测MACC1对人食管癌细胞增殖的影响，流式细胞术检测对MACC1细胞周期的影响。采用划痕实验及克隆形成实验观察感染或转染前后食管癌细胞侵袭及迁移变化。
　　4.采用Western blot检测Ad-MACC1和MACC1 siRNA处理食管癌细胞TE13和EC109后的增殖细胞核抗原(PCNA)和c-MET等的表达。
　　结果:
　　1.MACC1在食管癌细胞株EC9706和Eca109中表达较正常食管上皮细胞株HEEpiC中高，而在TE13和EC1中表达较低。
　　2.成功构建Ad-MACC1和MACC1 siRNA，Ad-MACC1感染TE13细胞后，MACC1基因和蛋白的表达增加。而MACC1 siRNA转染EC109细胞后，MACC1基因和蛋白的表达降低。
　　3.Ad-MACC1感染TE13细胞后，细胞的增殖和迁移明显的增加。而MACC1 siRNA转染EC109细胞后，细胞的增殖和迁移受到明显的抑制。
　　4.Ad-MACC1感染TE13细胞后，PCNA和c-MET基因和蛋白表达明显增加，而MACC1siRNA转染EC109细胞后，PCNA和c-MET基因和蛋白表达较阴性对照组降低。
　　结论:
　　MACC1在EC9706和Eca109中表达较TE13和EC1高，其高表达可促进细胞的增殖和迁移，而表达下调后明显抑制食管癌细胞的增殖、侵袭及转移潜能，MACC1高表达促进PCNA和c-MET的表达，而低表达抑制其表达。MACC1促进食管癌细胞的增殖、侵袭及转移。其机制可能通过调节下游基因c-MET表达水平实现。

目录

声明

摘要

英文缩略语名词对照表

前言

第一章 文献综述 MACC1与恶性肿瘤的关系

1 MACC1的概述

2 MACC1在恶性肿瘤中表达及意义

3 临床应用及展望

第二章 MACC1在食管癌细胞株中的表达及其载体的构建

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．2．1 细胞培养的准备工作

2．2．2 细胞培养

2．2．3 重组腺病毒载体的构建

2．2．4 重组腺病毒载体感染HEK293A细胞进行病毒扩增

2．2．5 重组腺病毒滴度测定

2．2．6 MACC1 siRNA转染Eca109细胞

2．2．7 RT-PCR

2．2．8 Western Blotting检测MACC1蛋白的表达

2．2．9 统计学方法

2．3 实验结果

2．3．1 MACC1 mRNA在ESCC细胞株中的表达

2．3．2 MACC1蛋白在ESCC细胞株中的表达

2．3．3 Ad-MACC1感染TE13细胞后MACC1蛋白的表达

2．3．4 MACC1 siRNA转染Eca109细胞后MACC1基因的表达

2．4 讨论

第三章 MACC1对ESCC细胞增殖和迁移的影响

3．1 材料和方法

3．1．1 主要试剂和仪器

3．1．2 细胞培养

3．1．3 MACC1过表达和沉默

3．1．4 MTT法检测MACC1过表达或沉默对细胞增值能力的影响

3．1．5 流式细胞仪检测MACC1过表达或沉默对细胞周期的影响

3．1．6 刮除-迁移分析法(Scrape-migration assay)

3．1．7 槽迁移率分析(Boyden chamber migration assay)

3．1．8 增殖和迁移相关蛋白表达的检测

3．1．9 统计学方法

3．2 实验结果

3．2．1 MACC1抑制细胞的增值

3．2．2 增殖细胞核抗原(PCNA)表达

3．2．3 细胞周期的变化

3．2．4 MACC1促进细胞迁移

3．2．5 MACC1促进细胞克隆形成

3．2．6 c-MET的表达

3．3 讨论

第四章 主要结论与展望

4．1 主要结论

4．2 展望

致谢

参考文献

作者简介