多巴胺分子印迹搅拌棒的制备及其应用于人体尿液中多巴胺的检测

摘要

多巴胺(Dopamine，DA)是中枢神经系统内的一种重要神经递质。多巴胺对机体某些行为和功能，包括意识、运动、情绪、记忆、神经内分泌调节等都有着广泛的影响。体内多巴胺含量的准确测定在临床诊断以及神经类疾病的病理机制研究方面起着非常重要的作用。但由于DA存在于复杂生物基质中，含量较低，所以建立高灵敏度，高选择性和快速分离的方法对检测生物样品中痕量DA具有十分重要的现实意义。 搅拌棒吸附萃取（Stir bar sorptive extraction，SBSE）是近几年发展较为迅速的一种样品前处理技术，具有萃取容量高，避免额外加入搅拌子造成吸附，在自身搅拌的同时实现分离富集等优点。但由于SBSE涂层种类较少，选择性较差而限制其发展和应用范围。分子印迹搅拌棒吸附萃取(Molecularly imprinted stirbar sorptive extraction，MI-SBSE)结合了分子印迹聚合物和SBSE的优点，通过将分子印迹聚合物作为萃取涂层来提高搅拌棒对目标分子吸附的选择性，在富集的同时，能够排除样品中复杂基质的干扰，具有良好的发展前景。 本文以DA为模板分子制备了分子印迹聚合物为涂层的搅拌棒(MIP-SBs)，并成功用于健康志愿者尿液中DA含量的测定，概要介绍如下。 一、MIP-SBs的制备 以DA为模板分子，α-甲基丙烯酸为功能单体，乙二基二甲基丙烯酸酯和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂，60℃下偶氮二异丁腈引发自由基聚合反应，实验中优化了聚合反应试剂的用量以及配比、反应溶剂、温度、时间等条件，同时还对吸附解吸附的条件如溶剂、时间、pH等作了相应的研究，最后通过红外光谱和扫描电镜对所制备的搅拌棒进行结构和形态表征，证明MIP-SBs制备成功。 二、MIP-SBs性能的评价 MIP-SBs的性能考察主要包括萃取容量、选择性、耐溶剂性能和使用寿命。结果表明:MIP-SBs的萃取量为20.29 nmol，约是NIP-SBs萃取量5.06 nmol的4倍，MIP-SBs在含有DA及其三种结构类似物的混合水溶液中进行吸附萃取时，对DA有高度选择性，其回收率大于其他三种类似物，另外，MIP-SBs有较好的耐溶剂性能。 三、MIP-SBs的应用 将MI-SBSE与高效液相色谱联用，建立了测定健康志愿者尿液中DA含量的方法。在0.378-18.9 ng/mL浓度范围内有良好的线性关系，线性方程:A=2970.9C+2197，其中C是DA的浓度，A是色谱峰面积，相关系数为0.9995，检测限(S/N=3)是0.0189 ng/mL，定量限(S/N=10)是0.0945 ng/mL。高中低三个浓度的相对标准偏差(n=5)均在3.42-8.61％之间，DA的回收率均高于80％，精密度良好。 运用所建立的方法，测出两名健康志愿者尿液（稀释四倍后）中DA的含量分别是1.19和1.07 ng/mL，DA的加标回收率为92.3％-106.8％之间，且RSD在13.15％(n=3)以内。

目录

声明

英文缩写一览表

摘要

1 引言

2 实验部分

2．1 试剂

2．2 仪器

2．3 色谱条件

2．4 MIP-SBs的合成

2．5 MIP-SBs的表征

2．6 MIP-SBs的吸附萃取过程

2．7 MIP-SBs吸附条件的优化

2．8 MIP-SBs吸附性能评价

2．9 MIP-SBs的实际应用

3 结果与讨论

3．1 MIP-SBs的合成原理

3．2 MIP-SBs的合成

3．3 MIP-SBs的表征

3．4 MIP-SBs吸附条件的优化

3．5 MIP-SBs的性能研究

3．6 分析方法的建立及其实际应用

4 结论

参考文献

综述 分子印迹搅拌棒的发展近况

硕士期间发表文章

致谢