PGE2通过EP2受体激活Src--EGFR信号转导通路上调Snail促进肝癌细胞侵袭机制的研究

摘要

研究背景: 恶性肿瘤是导致人类死亡的主要原因之一。在我国，肝癌的发病率及死亡率位于第二位，目前对于肝细胞癌还缺乏有效的治疗手段，预后较差。因此，探索肝癌的发病机制及治疗靶点极其重要。 前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)是花生四烯酸经环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)催化的主要代谢产物，通过细胞膜上四种EP受体(E prostanoid receptor)发挥作用，可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。研究表明PGE2与多种肿瘤的发展密切相关，其中包括肝细胞癌。 肿瘤的侵袭和转移与上皮-间叶转化(epithelial mesenchymaltransition,EMT)现象密切相关，目前认为Snail蛋白是调控EMT的一个重要蛋白与多种肿瘤的侵袭转移相关，如卵巢癌、大肠癌等。 本课题组的前期研究工作发现PGE2与肝癌细胞的侵袭转移密切相关，且具有上调Snail蛋白的作用。但PGE2通过何种方式调节Snail蛋白表达促进肝癌侵袭和转移的其机制尚未明确。本研究应用PGE2、EP2受体激动剂、EGFR抑制剂、PI3K抑制剂等处理肝细胞癌Huh-7细胞，观察Snail蛋白表达水平变化，意在阐明PGE2通过EP2受体调控Snail蛋白表达的机制。 研究目的: 探讨PGE2通过EP2受体上调肝细胞癌细胞中Snail蛋白的表达及相关的信号转导通路。 研究方法: 1.细胞培养:常规方法培养肝细胞癌细胞株Huh-7细胞。 2.外源性PGE2处理Huh-7细胞，用Transwell方法检测迁移和侵袭能力。 3.外源性PGE2和EP2受体激动剂Butaprost处理Huh-7细胞，用Western blot实验检测Snail蛋白水平的变化。 4.Src抑制剂PP2、EGFR抑制剂AG1478、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂PP242处理Huh-7细胞，用Western blot实验检测Snail蛋白水平的变化。 5.Butaprost处理Huh-7细胞0-60min，以Western blot实验检测Phospho-EGFR、Phospho-Akt、Phospho-mTOR的变化。 研究结果: 1.10μM PGE2处理Huh-7细胞12h后，Huh-7细胞的迁移能力较对照组增强了192％(P＜0.05);10μM PGE2处理Huh-7细胞24h后，Huh-7细胞的侵袭能力较对照组增强了186％(P＜0.05)。 2.10μMPGE2处理Huh-7细胞24h后，Huh-7细胞的Snail蛋白表达水平与对照组相比升高了120.15％(P＜0.01)。 3.5μM Butaprost处理Huh-7细胞24h后，Snail蛋白的表达水平与对照组相比上升了174.15％(P＜0.01)。 4.与EP2受体激动剂处理组相比，10μM的Src抑制剂PP2和5μM的EGFR抑制剂AG1478使Huh-7细胞Snail蛋白水平分别下降了89.61％(P＜0.01)和67.92％(P＜0.01)、10μM的PI3K抑制剂LY294002和5μM的mTOR抑制剂PP242使Snail蛋白水平分别下降了56.63％(P＜0.01)和99％(P＜0.05)。 5.与EP2受体激动剂处理组相比，10μM Src抑制剂PP2、5μM的EGFR抑制剂AG1478使Butaprost诱导Phospho-Akt的水平下降了85.69％，75.45％(P＜0.05)。 6.5μM Butaprost处理Huh-7细胞0-60min后，Phospho-EGFR、Phospho-Akt、Phospho-mTOR水平与对照组相比分别上升了91.54％、134.67％、100.24％(P＜0.05)。 研究结论: 本研究结果表明，PGE2能够通过EP2受体上调Huh7细胞Snail蛋白的表达，此作用可能是通过Src/EGFR/Akt/mTOR信号转导通路实现的。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1．实验材料

2．实验方法

实验结果

1 PGE2对Huh-7细胞迁移侵袭能力的影响

2 PGE2对Huh-7细胞Snail蛋白表达的影响

3 EP2受体在PGE2上调Snail蛋白表达水平中的作用

4 PGE2通过EP2受体上调Snail蛋白表达的机制

讨论

研究小结

参考文献

文献综述 EMT与肿瘤

攻读学位期间发表文章情况

致谢