色素上皮源因子通过PI3K/Akt通路和PPARγ降低骨水泥单体对心肌细胞的毒性作用

摘要

目的：研究色素上皮衍生因子(PEDF)对骨水泥单体(甲基丙烯酸甲酯，MMA)导致的大鼠胚胎成心肌细胞系H9c2细胞毒性的保护作用及其机制。
　　方法：体外培养大鼠胚胎成心肌细胞系H9c2细胞，在不同时间以不同的剂量MMA作用于H9c2心肌细胞，观察MMA对H9c2心肌细胞的毒性作用。PEDF预处理H9c2细胞，观察PEDF对心肌细胞的保护作用。采用CCK-8法检测MMA在不同剂量、不同时间干预H9C2细胞后的生存率。以AnnexinⅤ-FITC/PI对细胞荧光双染色，用流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞，确定被作用的H9c2细胞在不同时间（2h和24h）的坏死或凋亡。以2'，7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2'，7'-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA)分子探针检测细胞内的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平;以超氧化物歧化酶SOD试剂盒、丙二醛MDA试剂盒分别检测MMA作用后细胞的氧化应激相关指标。以蛋白免疫印迹(Western blot)检测相关蛋白（PPARγ、Akt、caspase-3、Rip-3和bcl-2）的表达或活性变化。
　　结果：①CCK-8检测显示，MMA作用H9c2细胞2h和24h，可降低细胞生存率；②荧光双染后流式细胞仪和荧光显微镜形态观察显示，干预2h，MMA组细胞死亡形式主要为坏死，PEDF预培养+MMA组坏死显著减少(P＜0.05);干预24h，MMA组细胞死亡形式主要为凋亡，与MMA组比较，PEDF预培养+MMA组细胞凋亡显著减少（P＜0.05）；③DCFH-DA检测ROS结果显示，干预2h和24h，MMA组ROS水平均显著升高(P＜0.05)，与MMA组比较，PEDF预培养+MMA组都ROS显著降低(P＜0.05)；④SOD和MDA检测结果显示，与MMA组相比，PEDF能显著增加SOD的活性，减少MDA的含量（P＜0.05）；⑤Western blot测定结果表明，干预24h，MMA组上调cleaved caspase-3、p-bcl-2、Rip-3的表达，下调p-Akt1(S473)、PPARγ的表达(P＜0.05);与MMA组相比，PEDF+MMA组cleaved caspase-3、p-bcl-2、Rip-3表达显著降低，p-Akt1(S473)、PPARγ表达显著增加(P＜0.05)。
　　结论：⑴MMA导致H9c2细胞凋亡和细胞程序性坏死，降低H9c2细胞的存活率；⑵PEDF预处理H9c2心肌细胞可减少MMA导致的H9c2心肌细胞的凋亡及程序性坏死；⑶PEDF增强H9c2心肌细胞抗氧化应激而发挥细胞保护作用。该作用可能是通过PI3K/Akt通路上调PPARγ表达、增强Akt的活性，抑制Bcl-2活性、Caspase-3及Rip-3蛋白表达而实现。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

1．材料

2．方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 骨水泥植入综合征的研究进展

附录

攻读学位期间发表文章情况