LMP2A通过诱导mTOR和4EBP1-eIF4E轴的活化增强MTA1的翻译表达介导鼻咽癌上皮间质转化的研究

摘要

Epstein-Barr病毒编码的潜伏膜蛋白2A(LMP2A)促进了鼻咽癌(NPC)上皮间质转化(EMT)的发生，从而提高了肿瘤的侵袭性。研究发现，转移性肿瘤抗原1(MTA1)的过表达在多种癌症中被发现具有提高肿瘤转移的功能。LMP2A和MTA1这两个蛋白之间的分子机制关联已经提出了，但没有得到深入研究阐明。在这项研究中，免疫组化分析发现MTA1高表达与鼻咽癌淋巴结转移和远处转移呈正相关。在鼻咽癌组织中MTA1高表达于癌巢和癌浸润发生部位。MTA1的高表达与E钙粘蛋白(E-cadherin)表达呈负相关，和波形蛋白(vimentin)的表达呈正相关。构建MTA1过表达和干扰表达的鼻咽癌细胞系，免疫印迹和侵袭小室实验检测MTA1对鼻咽癌细胞侵袭和EMT发生的影响。通过免疫印迹和免疫荧光检测wnt1通路和β-链蛋白（β-catenin）核转位来研究MTA1发挥功能的机制。实验结果表明，MTA1通过wnt1通路活化促进了鼻咽癌的转移和EMT发生。然后本研究探讨了LMP2A通过雷帕霉素的机制效应蛋白(mTOR)的下游调控通路真核细胞始动因子4E结合蛋白-真核起始因4E(4EBP1-eIF4E)轴增强了MTA1的蛋白表达从而促进了鼻咽癌的EMT发生。总而言之，MTA1高表达对鼻咽癌侵袭的促进作用是通过wnt1通路和β-catenin的活化促进了EMT的发生实现的。进而，通过mTOR下游调控通路4EBP1的抑制剂INK-128的作用，我们发现LMP2A表达激活了4EBP1-eIF4E通路，并增加了MTA1蛋白在翻译水平，并且不完全依赖于c-myc的调控。这些发现为理解LMP2A和MTA1蛋白之间的分子机制关系提供了新的见解，同时揭示了4EBP1-eIF4E通路在鼻咽癌EMT发生过程中的作用。

目录

声明

摘要

前言

一、材料

1、临床标本

2、实验动物

3、实验试剂及耗材

4、实验仪器

二、方法

1、免疫组化实验

2、载体构建、慢病毒包装及目的细胞系构建

3、免疫印迹实验

4、划痕愈合实验

5、侵袭小室实验

6、免疫荧光实验

7、实时定量PCR实验

8、动物模型构建

9、统计分析

三、结果

1、免疫组织化学染色分析MTA1在鼻咽癌组织中的表达及其与鼻咽癌患者的临床病理学特征相关性

2、在NPC组织样本中MTA1的表达与EMT标记蛋白质的表达相关性分析

3、MTA1的表达水平影响NPC细胞的迁移、侵袭和EMT发生的能力

4、MTA1是由MTA1-Wnt1和Wnt1-GSK3β轴介导的β-catenin的激活来发挥功能

5、LMP2A诱导的迁移、侵袭和EMT发生在一定程度上是通过提高MTA1的表达水平来实现

6、LMP2A通过诱导mTOR信号通路和4EBP1-eIF4E的活化介导MTA1的表达

讨论与结论

参考文献

文献综述 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)调控蛋白质翻译的研究进展

缩略词附录

攻读学位期间发表文章情况

致谢