尼克酰胺甲基转移酶影响胃癌细胞的生物学功能和患者预后

摘要

目的:
　　在临床实践中，一些指标被广泛用于预测胃癌患者的预后。这些指标包括如癌胚抗原(CEA)、ca199等分子标志物的联合检测以及肿瘤分期与分级的划分。但是，这些预测患者预后的方法依然有一定的局限性，所以，胃癌仍然是最致命的人类恶性肿瘤之一。代谢酶尼克酰胺甲基转移酶(NNMT，EC.2.1.1.1)曾被报道参与各种癌的进展和发展。然而，NNMT在胃癌中的预后和生物功能尚不清楚。
　　方法:
　　1.利用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃癌患者新鲜组织（包括肿瘤组织和瘤旁组织）NNMT的mRNA表达是否存在差异。
　　2.采用免疫组织化学(IHC)的方法，检测蜡块中良恶性胃粘膜上皮组织中的NNMT蛋白质表达的差异。
　　3.统计并评估患者胃癌组织中NNMT蛋白表达与临床病理及预后的关系。
　　4.利用siRNA介导，抑制NNMT在胃腺癌细胞株MGC803、BGC823中的表达，探究NNMT在胃癌细胞系体内外的生物学功能。
　　5.充分检索并分析数据库TCGA，并利用cBioPortal网站计算并得出NNMT共表达基因列表，采用DAVID Bioinformatics Resources6.7对列表中的高表达相关性基因进行富集分析。
　　结果:
　　1.通过qRT-PCR实验发现与邻近非癌组织相比，NNMT的mRNA和蛋白水平在胃癌组织中上调;通过免疫组化实验发现NNMT蛋白表达水平在胃癌组织中的表达明显升高(56.8％vs31.9％)。
　　2.NNMT的蛋白表达水平与原发肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和TNM分期有相关性。
　　3.单因素和多因素COX回归生存分析验证了NNMT的蛋白表达是胃癌患者总存活率的独立预后因素。
　　4.用siRNA干扰胃癌细胞系MGC803、BGC823中NNMT的表达水平，细胞增殖、侵袭和迁移在体内外都受到了抑制。
　　结论:
　　总体而言，这项研究的结果表明NNMT的表达在胃癌组织中上调，并能促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭。最重要的是，NNMT的表达水平是一个潜在的预测胃癌患者预后的新靶点。

目录

声明

摘要

前言

第一部分：尼克酰胺甲基转移酶在胃癌组织中的表达及预后影响

材料

1、TCGA数据库

2、组织标本

3、实验试剂

4、实验仪器

5、引物

方法

1、总RNA的提取(Trizol法)

2、逆转录cDNA

3、实时荧光定量PCR

4、组织芯片的制备

5、免疫组化分析

5、统计学分析

结果

一、TCGA数据库分析

二、NNMT在胃癌及癌旁组织中的表达情况

三、NNMT的表达与胃癌临床病理特征的关系

四、NNMT的表达与胃癌预后的关系

第二部分：尼克酰胺甲基转移酶影响胃癌细胞生物学功能

材料

一、实验材料

二、实验仪器及耗材

方法

1、细胞培养

2、实时荧光定量PCR检测mRNA表达

3、Western blot蛋白测定

5、碘化丙锭PI单染法检测细胞周期

6、CCK8实验检测细胞增殖能力

7、细胞转染

8、生物信息学分析

9、裸鼠成瘤实验

10、统计学分析

结果

1．NNMT在胃癌细胞系中的表达情况

2．沉默NNMT胃癌细胞系的构建

3．沉默NNMT对胃癌细胞系MGC803和BGC823迁移和侵袭能力的影响

4．沉默NNMT对胃癌细胞系MGC803和BGC823细胞周期和增殖能力的影响

5．沉默NNMT对裸鼠成瘤能力的影响

6．沉默NNMT后可能影响的信号通路

讨论

结论

参考文献

文献综述 尼克酰胺甲基转移酶在恶性肿瘤中的研究进展

攻读学位期间发表文章

附录

致谢