替格瑞洛含药血清对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤作用及机制研究

摘要

目的:探究药物替格瑞洛对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤作用及机制。
　　方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1，抽取一例服用替格瑞洛(180mg/d)后2h的急性冠脉综合征(ACS)病人血液标本，将其离心后取上层血清，与高糖培养液DMEM混合后配置成浓度分别为5％、10％、15％、20％的替格瑞洛含药血清，同时取该病人服用替格瑞洛前的正常血清作为对照，与人胃黏膜上皮细胞株GES-1共同培养24h、48h及72h，采用倒置相差显微镜观察正常对照组GES-1的形态以及各个浓度药物与GES-1细胞共同培养24h后的细胞形态学改变情况、噻唑蓝试剂盒(MTT)测定GES-1细胞活力及增殖情况、流式细胞仪检测各浓度组含药血清与GES-1共培养24h后细胞凋亡情况，细胞免疫荧光法检测各组细胞中Occludin、ZO-1蛋白表达，透射电镜观察对照组和15％含药血清实验组细胞紧密连接结构的变化，蛋白免疫印迹法检测对照组和各浓度药物组细胞中目标蛋白Occludin及ZO-1的表达。
　　结果:倒置相差显微镜下观察发现对照组GES-1细胞数量较多，铺满整个视野，细胞形态规则，外观呈扁平长梭状，而实验组GES-1细胞数目减少，细胞外形变圆或者不规则、可见较多凋亡细胞漂浮于培养瓶内;MTT比色法显示替格瑞洛含药血清对GES-1细胞的损伤随着浓度增加而加重，各浓度组间差异有统计学意义，而同一组细胞不同培养时间下的细胞增殖抑制率无统计学差异;流式细胞术检测表明，实验组细胞凋亡率随着药物浓度增加而逐渐增大，各浓度组间差异有统计学意义;细胞免疫荧光法显示实验组细胞Occludin、ZO-1表达降低，阳性染色区面积减小，平均光密度值降低;透射电镜观察发现对照组GES-1细胞胞膜完整、细胞间连接结构紧密无缺损，可见桥粒，而实验组细胞间紧密连接结构有缺损破坏，桥粒消失，细胞间隙增大;蛋白免疫印迹实验发现实验组紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达量下降。
　　结论:替格瑞洛作用于人胃黏膜上皮细胞后可抑制其增殖并促进其凋亡，可使紧密连接蛋白Occludin及ZO-1的表达降低，从而损伤胃黏膜屏障。

目录

声明

英文缩略词对照表

摘要

前言

材料及方法

一、材料

二、实验方法

三 统计学处理

结果

二．替格瑞洛对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

三、不同浓度替格瑞洛含药血清对人胃粘膜上皮细胞GES-1凋亡的影响

四．细胞免疫荧光法检测正常对照组及各浓度实验组Occludin、ZO-1蛋白表达

五、透射电镜观察正常对照组及替格瑞洛实验组对GES-1细胞紧密连接的影响

六．Western-bolt蛋白免疫印迹法检测正常对照组及不同浓度替格瑞洛含药血清实验组对紧密连接蛋(Occludin、ZO-1表达的影响

讨论

小结

参考文献

综述 新型抗血小板药物替格瑞洛

攻读学位期间发表文章情况

致谢