白介素-11受体介导分子靶向探针对宫颈癌模型显像的基础研究

摘要

目的:本实验通过检测HELA细胞IL-11Rα表达情况，构建IL-11类似物环九肽c(CGRRAGGSC)标记探针，探讨其在荷瘤裸鼠模型中靶向IL-11Rα显像特异性，为人宫颈癌的诊断及治疗提供一种新的有效途径和方法。
　　方法;(1)通过Western Blot方法检测宫颈癌HELA细胞系和人正常宫颈上皮细胞系HCerEpic中的IL-11Rα的表达情况，并用FITC化学标记c(CGRRAGGSC)进行细胞免疫荧光实验，检测其与HELA细胞体外结合特异性;制备近红外标记探针Cy7-c(CGRRAGGSC)，经尾静脉注射并于不同时间点行近红外活体成像，探讨其体内靶向结合特异性;(2)在氯化亚锡缓冲盐溶液中对环九肽进行99Tcm标记，制备放射性核素探针99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)，并对其标记率、放射化学纯度、体外稳定性及生物相容性进行检测;(3)尾静脉注射标记探针99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)，检测该探针在模型鼠体内生物分布情况;(4)通过瘤体间质注射1.82MBq99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)及游离99TcmO4-，于不同时间点行SPECT显像。
　　结果:(1) Western Blot结果表明HELA细胞明显表达IL-11Rα蛋白，而在HCerEpic细胞中极少表达;体外细胞结合实验证明FITC-c(CGRRAGGSC)能够特异性与HELA细胞的胞质和胞膜结合;活体近红外显像结果表明近红外标记探针长时间聚集于肿瘤部位，标记化合物体内靶向显影好。(2)放射性核素标记探针99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)即时标记率达96.62％，将其分别置于常温和人新鲜血清37℃下孵育，12h放化纯度仍可达90％左右，表明其标记率高，体外稳定性好，与血清生物相容性佳。(3)核素标记产物在荷瘤裸鼠体内分布实验结果说明局部肿瘤组织对99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)有持续较高的摄取率，肿瘤清除较缓慢，在体内主要经肾脏膀胱代谢，部分经肝脏清除，余脏器则分布较少。(4)99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)经瘤体注射后，见肿瘤局部即刻浓聚，且保持较长时间;而瘤体间质内注射游离99TcmO4-后约0.5h即见放射性几乎消退;表明该核素标记化合物对肿瘤组织具有良好的滞留性。
　　结论:宫颈癌HELA细胞高表达IL-11Rα，受体蛋白主要位于细胞的胞质及胞膜上;成功制备出核素标记探针99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)在本实验中起着关键作用，它们具有稳定性高，靶向特异性好，代谢途径佳等优良特性，为标记探针在高表达IL-11Rα的宫颈癌模型体内分布及显像研究提供科学基础，核素显像及近红外显像结果表明标记探针与IL-11Rα结合具有高度靶向特异性，c(CGRRAGGSC)将有望用于由临床上表达IL-11Rα介导的肿瘤早期特异诊断及靶向治疗研究。

目录

声明

摘要

中英文缩略对照表

前言

第一章 宫颈癌IL-11R α的表达及体内外靶向性研究

1 实验器材

1．1 实验设备和仪器

1．2 实验试剂

1．3 实验细胞株

1．4 实验动物

2 方法

2．1 HELA及HCerEpic细胞培养和蛋白提取

2．2 Western Blot法检测蛋白表达情况

2．3 共聚焦细胞免疫荧光体外结合试验

2．4 建立裸鼠皮下宫颈癌移植瘤模型

2．5 Cy7-c(CGRRAGGSC)在荷瘤裸鼠模型体内近红外显像试验

3 结果

3．2 细胞免疫荧光体外结合试验结果

3．3 荷瘤Balb／C裸鼠模型的建立

3．4 Cy7-c(CGRRAGGSC)在荷瘤裸鼠模型体内近红外显像结果

3．5 离体组织近红外显像

4 讨论

第二章 99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)的制备及其在宫颈癌模型鼠体内分布、SPECT显像研究

1 实验器材

1．1 实验设备和仪器

1．2 实验试剂

2 方法

2．3 99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)在荷瘤裸鼠模型体内分布实验

2．6 实验数据统计学分析

3 结果

3．1 纸层析结果

3．3 99Tcm-DTPA-c(CGRRAGGSC)的体内分布实验

3．4 荷瘤裸鼠模型SPECT显像结果

3．5 病理学检查

4 讨论

参考文献

综述 分子成像技术发展及其在肿瘤诊疗中的应用

研究生期间论文发表情况

致谢