猪冷冻稀释液中添加不同的抗氧化剂提高冻融后精液品质的研究

摘要

本次研究的主要目的是评估冷冻稀释液中添加不同的抗氧化剂对冻精解冻后精子质量参数、膜脂质过氧化程度及体外受精率的影响。以手握法采集的猪精液为试验材料，进行处理后，用不同规格的细管进行了冷冻试验。试验主要分3步进行：Ⅰ将精液按不同的比例稀释，以不同的速度离心后，除去上清液，再用冷冻稀释液进行稀释，然后用不同容量的细管进行冷冻，解冻后对精液品质进行生物学检测；Ⅱ在冷冻稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸和N-乙酰半胱氨酸+L-半胱氨酸混合物，配制成不同的冷冻稀释液，冷冻解冻后对精液品质进行生物学检测。Ⅲ在冷冻稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸和N-乙酰半胱氨酸+L-半胱氨酸混合物，用细管进行冷冻解冻后，对膜脂质过氧化反应的程度进行生物学检测。试验结果如下： 1、800转/分离心后，精子的活率、顶体完整率显著高于500转/分和1000转/分的，而低渗膨胀率却显著低于500转/分和1000转/分的(P<0.05)；1000转/分离心后，精子的顶体完整率显著降低，而低渗膨胀率却大大地提高(P<0.05)。虽然，不同的离心速度对运动学参数没有影响(P>0.05)，但是800转/分的离心效果要好于500转/分和1000转/分的。 2、精液1：1稀释与1：2稀释的结果，其冷冻后精子的活率差异不显著(P>0.05)：但1：1稀释的其冷冻后精子的顶体完整率显著高于1：2稀释的(超过了15个百分点)，而低渗膨胀率却显著低于1：2的(10个百分点)；在运动学参数方面，只有LIN显著降低(P<0.05)，而对其它的运动学参数没有影响(P>0.05)。从冷冻所使用的细管来看，两种不同比例稀释后，在其各方面的指标中，0.5ml细管的冷冻效果要优于0.25ml细管的，但两者之间差异不显著(P>0.05)。 3、与对照组相比，在冷冻稀释液中添加1mM的N-乙酰半胱氨酸能显著地提高解冻后精子的活率和顶体完整率，降低精子的低渗膨胀率(P<0.05)。在运动学参数方面，只有VAP显著升高(P<0.05)，而对其它的运动学参数没有影响(P>0.05)。体外胚胎生产的数据显示：在冷冻稀释液中添加不同浓度的N-乙酰半胱氨酸对卵裂率没有影响(P>0.05)。 4、与对照组相比，在冷冻稀释液中添加0.1mg/ml的L-半胱氨酸能显著地提高解冻后精子的活率和顶体完整率，降低精子的低渗膨胀率(P<0.05)，而对运动学参数没有影响(P>0.05)。体外胚胎生产的数据显示，与对照组、0.2mg/ml处理组和0.3mg/ml处理组相比，在冷冻稀释液中添加0.1mg/ml的L-半胱氨酸可以显著地提高卵裂率(P<0.05)。 5、与对照组相比，在冷冻稀释液中添加1mM N-乙酰半胱氨酸+0.1mg/ml L-半胱氨酸能显著地提高解冻后精子的活率和顶体完整率，降低精子的低渗膨胀率(P<0.05)。在运动学参数方面，只有LIN降低，而VAP、ALH和BCF都显著提高(P<0.05)。体外胚胎生产的数据显示：与对照组相比,在冷冻稀释液中添加1mM N-乙酰半胱氨酸+0.1mg/ml L-半胱氨酸，可以显著地提高卵裂率(P<0.05)。 6、与对照组相比，在冷冻稀释液中添加不同浓度的L-半胱氨酸，膜脂质过氧化水平明显降低(P<0.05)；而添加N一乙酰半胱氨酸和L-半胱氨酸+N-乙酰半胱氨酸，对膜脂质过氧化反应没有影响(P>0.05)。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1猪精液冷冻的基本原理

1.2影响猪精液冷冻的因素

1.3猪精子质量评估研究进展

1.4抗氧化剂对猪精液冷冻保存效果的影响

1.5本文研究的主要内容

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

第三章结果与分析

3.1不同的离心速度对细管冻精的影响

3.2不同规格的细管和稀释比例对细管冻精的影响

3.3添加不同的抗氧化剂对精液冷冻保存效果的影响

第四章讨论

4.1不同的离心速度对细管冻精的影响

4.2不同的稀释比例对细管冻精的影响

4.3不同的冷冻剂型对细管冻精的影响

4.4N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响

结 论

参考文献

致谢