Asia-I型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗株的构建及小鼠免疫实验研究

摘要

口蹄口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）引起偶蹄动物感染的烈性传染病之一，目前呈世界范围流行趋势，其有7种血清型，型间不能交叉保护，极易变异。疫苗接种仍是当前预防口蹄疫的重要手段。而传统疫苗有着诸多不安全因素。因此，如何设计、研制安全有效的新型口蹄疫疫苗是当前亟待解决的重要科学问题。所以本研究构建了针对 Asia-Ⅰ型 FMDV的重组鸡痘病毒，并进行了小鼠免疫试验研究，其内容如下：
　　利用本实验室保存的Asia-Ⅰ型FMDV P1-2A和3C基因通过酶切、回收和连接等方法构建了主要针对Asia-Ⅰ型FMDV的基因表达盒P1-2A-3C。再通过酶切、回收和连接等方法将表达盒 P1-2A-3C克隆至重组鸡痘病毒中间转移载体 pUTA2上，构建成pUTA2-P1-2A-3C。再利用脂质体转染法通过BrdU加压筛选出一株含有 FMDV表达盒 P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒疫苗：vUTA2-P1-2A-3C，并通过RT-PCR、IFA检测方法对重组鸡痘病毒鉴定。将鉴定正确的FMD重组鸡痘病毒疫苗免疫 BALB/c小鼠，并检测体液与细胞免疫指标。研究结果表明，FMD重组鸡痘病毒疫苗免疫组及灭活苗免疫组的小鼠均能产生特异性抗体（与对照组相比，P＜0.05）。首免14d后灭活苗免疫组FMDV抗体水平高于vUTA2-P1-2A-3C疫苗免疫组，但直至首免后21d差异不显著。至首免后第28d时灭活苗免疫组FMDV抗体水平显著高于vUTA2-P1-2A-3C免疫组（P＜0.01）。流式细胞仪检测所得数据统计学分析结果表明，与鸡痘野毒对照组及PBS对照组比较，用灭活苗和重组鸡痘病毒免疫组小鼠的T淋巴细胞亚类CD4+CD3+和CD8+CD3+的数量极显著提高（P＜0.01）。重组疫苗免疫组CD4+CD3+、CD8+CD3+淋巴细胞亚类数量显著高于灭活苗免疫组（P＜0.05）。而对照组之间差异不显著。T淋巴细胞增殖试验结果表明，用灭活苗和重组鸡痘病毒疫苗免疫组小鼠 T淋巴细胞特异性增殖反显著高于各对照组特异性反应（P＜0.05）。而重组疫苗免疫组T淋巴细胞特异性增殖反应显著高于灭活苗免疫组（P＜0.05）。用 ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌 IFN-γ斑点数实验结果表明，FMD重组鸡痘病毒疫苗免疫组IFN-γ斑点数量（66.00）较灭活苗（46.50）显著增多（P＜0.05）。而各对照组之间差异不显著。
　　上述结果说明所构建FMD重组鸡痘病毒疫苗有免疫原性，此研究为研制安全有效的新型口蹄疫疫苗奠定了一定基础。

目录

声明

前言

1 口蹄疫病毒的分子生物学特性研究进展

2 口蹄疫疫苗研究进展

3 本研究的目的及意义

试验材料

1 菌株、质粒、细胞和病毒

2 酶类及试剂

3 主要仪器

4 各种溶液及培养基

5 实验动物

方法

1构建思路及设计

2 FMDV鸡痘病毒细胞内同源重组

3 重组鸡痘病毒免疫原性的初步研究

结果

1 重组鸡痘病毒疫苗构建及鉴定

2 动物试验结果

讨论

1 重组鸡痘病毒及鸡痘病毒载体

2 免疫基因选择

3.FMDV的免疫

结论

参考文献

致谢

作者简介