胡桃楸根氯仿提取物及其有效成分的抗肿瘤活性研究

摘要

目的：探讨胡桃楸根氯仿提取物对S180荷瘤小鼠体内的肿瘤抑制作用以及从植物胡桃楸根氯仿提取物中分离出的单体化合物对肿瘤细胞抗增殖作用及机理的研究。
　　方法：1：按照标准方法给50只昆明种小鼠接种S180肉瘤后，给予胡桃楸根氯仿提取物10 d，观察肿瘤质量变化及胸腺（脾脏）指数，比色分析法检测血清超氧化物歧化酶 superoxided ismutase（SOD）的活性及丙二醛 malondialdehyde（MDA）含量的变化，采用酶标双抗体夹心ELISA法检测血清TNF-α、IL-2水平。2：采用MTT比色法观察从胡桃楸根氯仿提取物中分离出的5种醌类化合物对人胃癌细胞（MGC-803）、人肺癌细胞（A549）、人白血病细胞（K562）、人宫颈腺癌细胞（HeLa）、人宫颈鳞癌细胞（CASKI）以及人宫颈鳞癌细胞（SiHa）6种肿瘤细胞株的增殖抑制作用，筛选出活性最好的单体化合物进行进一步的机理研究；我们采用流式细胞仪检测早期细胞凋亡，结合倒置显微镜、HE染色、免疫细胞化学染色方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、p53的蛋白表达，观察其诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
　　结果：1：胡桃楸根氯仿提取物具有明显的抑制肿瘤的作用，不同浓度的抑瘤率分别为48.37％、40.81%、36.52%，与模型对照组比较有显著性差异（P<0.01）；实验组的SOD活性高于模型对照组，而MDA含量低于模型对照组、TNF-α活性及IL-2诱生水平较模型对照组明显增高（P<0.05）；2：MTT检测结果显示，2号单体化合物（5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌）具有较强的细胞毒性。不同浓度5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌处理的实验组人宫颈癌HeLa细胞的生存率呈浓度和时间依赖性降低，与对照组相比均有显著性差异（P<0.001），其IC50值为3.75μmol/L；通过倒置显微镜观察，对照组HeLa细胞增殖能力随培养时间的延长明显增强，而实验组HeLa细胞增殖明显受抑制。随着时间的延长和药物浓度的增加，细胞抑制效果越明显，药物对肿瘤细胞生长有量－效、时－效关系；实验组HeLa细胞HE染色染色质浓缩，呈深染的新月体形；应用Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测了早期HeLa细胞凋亡，未经5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌处理的正常HeLa细胞凋亡细胞极少，经5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌处理的细胞，凋亡细胞的百分比明显高于正常对照组，其作用随着剂量的增加和时间的延长而增强，具有量－效关系和时－效关系；免疫细胞化学染色结果显示，5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌可下调Bcl-2及P53蛋白的表达，上调Bax蛋白的表达（P<0.001）从而促进细胞凋亡。
　　结论：1：胡桃楸根氯仿提取物具有显著抑制肿瘤的作用，其抑瘤作用机制可能是通过清除自由基并调节机体的免疫功能而抑制肿瘤细胞的增殖。2：5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌对HeLa细胞具有抗增殖作用及促进凋亡作用，其机制之一与下调Bcl-2蛋白的表达，上调Bax、p53蛋白的表达有关。

目录

声明

英文缩略词

绪论

第一部分 胡桃楸根氯仿提取物对小鼠S180肉瘤抑制作用的研究

第一章 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 统计学处理

第二章 结果

2.1 胡桃楸根氯仿提取物对小鼠S180肉瘤抑制率的影响

2.2 胡桃楸根氯仿提取物对Sl80肉瘤小鼠免疫器官的影响

2.3 胡桃楸根氯仿提取物对Sl80肉瘤小鼠血清SOD活性及MDA含量影响

2.4 胡桃楸根氯仿提取物对Sl80肉瘤小鼠血清TNF-α、IL-2的影响

第二部分 5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌体外抗肿瘤活性筛选及机理的研究

第一章 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3统计学处理

第二章 结 果

2.1细胞生长抑制测定

2.2 人宫颈癌HeLa细胞的形态学改变

2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡

2.4免疫细胞化学方法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平

第三部分 讨论与结论

3.1 讨论

3.1.1 胡桃楸根氯仿提取物对小鼠S180肉瘤抑制作用研究

3.1.2 单体化合物体外抗肿瘤活性筛选及机理研究

3.2 结论

参考文献

致谢

综述：中药抗肿瘤的研究进展