东北红豆杉提取分离工艺及化学成分研究

摘要

紫杉醇(paclitaxel，商品名 taxol)是一种对肿瘤有抑制作用的三环二萜类化合物，其抗癌机理独特，对各类癌症都有特殊的疗效，较长时间以来，紫杉醇一直是植物药物领域中最热点的抗肿瘤新药之一，但由于紫杉醇在植物体中含量仅万分之三，使得紫杉醇的分离纯化非常困难，现行紫杉醇工业生产方法，虽然较成熟，但因步骤繁琐，使紫杉醇产品成本居高不下，因此如何开发一种新的提取分离工艺，降低生产成本，并获得纯度符合市场需求的紫杉醇产品尤为重要.
　　本文对东北红豆杉枝叶中紫杉醇的提取和分离工艺进行了系统的研究。实验采用超临界二氧化碳流体进行提取，对工艺的影响因素一夹带剂，萃取压力，萃取温度，CO2流量等进行了详细的考察，其提取条件经单因素实验和正交实验后得到优化:萃取压力25.6 MPa，萃取温度为35.1℃，CO2流量为55 Kg/h。同时比较了超临界萃取和乙醇回流提取两种提取方法，实验证实，超临界萃取法较醇提法对紫杉醇的提取量提高了16.89％。
　　从东北红豆杉枝叶中分离紫杉醇有其特殊的困难，因为枝叶中含有大量的蜡质、脂溶性色素、树脂等物质，这些物质在进行提取时也会被提取出来从而使得分离过程更加困难。针对这一特点，本文设计了石油醚萃取和己烷沉淀相结合的方法，先以石油醚萃取除去蜡质等低极性物质，再进行己烷沉淀去除水溶性杂质，这种方法可以除去大部分杂质，极大提高了色谱柱的分离效率。
　　同时为了寻找其他的有效成分或合成紫杉醇的前体类似物，缓解紫杉醇供不应求的局面，我们对东北红豆杉枝叶的化学成分进行了研究，从中分离出了3个单体化合物。根据理化性质、以及1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱数据分析鉴定了其结构，它们分别是：??-sitosterol(1)、Dodecanol(2)、Taxinine(3)
　　我们将分离得到的紫杉宁单体进行了抗癌活性试验，并与紫杉醇做了对比试验，结果显示，紫杉宁也具有抗癌活性。

目录

声明

绪论

第一章 实验材料与仪器

1.1实验仪器与材料

1.2实验药材

第二章 东北红豆杉提取工艺优化

2.1紫杉醇含量测定方法学考察

2.2东北红豆杉提取工艺优化

2.3 小结

第三章 分离纯化紫杉醇

3.1样品预处理

3.2 一次层析

3.3二次层析

3.4 一次结晶

3.5 制备型高效液相分离

3.6 二次结晶

3.7 小结

第四章 紫杉醇及紫杉宁成分分离

4.1原料的制备

4.2紫杉醇前段样品的分离

4.3紫杉醇段样品的分离

4.4 化合物的结构测定

4.5化合物的结构图

4.6化合物的结构鉴定

4.7 小结

第五章 MTT法测试紫杉宁的体外抗癌作用

5.1实验材料与仪器

5.2试验方法

5.3结果

5.4结论

第六章 结果与讨论

致谢

参考文献

综述:紫杉醇的提取分离工艺

附录A攻读学位期间发表论文目录

附图