柱前衍生化反相高效液相色谱法分析去甲乌药碱

摘要

许多中药中都含有去甲乌药碱这种功效成分，例如买麻藤、莲子心、附子、北细辛等。去甲乌药碱是中药附子中存在的一种强心有效成分。本论文建立了以荧光衍生化试剂9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(Fmoc-Osu)与去甲乌药碱进行柱前荧光衍生化反相高效液相荧光检测的高灵敏分析方法。衍生化试剂与去甲乌药碱衍生化反应条件是硼酸缓冲溶液pH=8.5条件下25℃反应50 min，荧光检测波长：λex=265 nm，λem=315nm。本方法的最低检测限(S/N=3)为5ng/mL。线性范围为0.05～20μg/mL。线性关系良好达到R=0.9998。对实际样品中药附子、莲子心、北细辛进行样品前处理，利用所建立的分析方法首次成功地对附子、莲子心、北细辛中去甲乌药碱的含量进行了测定。得到了灵敏度高，稳定性好、选择性高、简便快捷的分析方法。本文具体内容如下：
　　第一章：文献综述先简述高效液相色谱柱前衍生化的研究进展。然后介绍了去甲乌药碱的生理药理作用以及分析方法现状。最后阐述了本实验研究的目的意义及内容。
　　第二章：用荧光衍生化试剂与去甲乌药碱进行柱前衍生化反应，考察了各种衍生化条件对衍生化反应的影响，并对流动相的种类和比例、流速等色谱条件进行了摸索，找到了最佳的衍生化条件和色谱条件。采用了反相高效液相色谱联用荧光检测器进行检测。建立了柱前荧光衍生化反相高效液相色谱法分析去甲乌药碱方法，并对所建立的方法通过精密度、稳定性实验进行了验证。
　　第三章：先对中药附子、莲子心、北细辛进行了介绍。根据实验建立了最佳的样品前处理的方法，利用所建立的分析方法对实际样品中药附子、莲子心、北细辛中去甲乌药碱的含量进行了测定，并通过加标回收率实验进行了方法验证。

目录

声明

第一章 文献综述

1.1高效液相色谱柱前衍生化研究现状及应用进展

1.1.1高效液相色谱柱前衍生化技术研究现状

1.1.2高效液相色谱柱前衍生化应用现状

1.2去甲乌药碱概述及研究现状

1.2.1去甲乌药碱的生理药理作用

1.2.2去甲乌药碱的分析方法的现状

1.3本文研究的目的、内容

第二章 柱前荧光衍生化反相高效液相色谱法分析去甲乌药碱方法的建立

2.1实验部分

2.1.1仪器与试剂

2.1.2标准溶液、衍生化试剂和缓冲溶液的配制

2.1.3衍生化反应

2.1.4 色谱条件

2.2 结果与讨论

2.2.1 柱前荧光衍生化反应条件的选择

2.2.2色谱条件的优化

2.2.3 去甲乌药碱荧光衍生化色谱图

2.2.4 实验方法的验证

2..3本章小结

第三章 柱前荧光衍生化反相高效液相色谱法测定莲子心、附子、北细辛中去甲乌药碱的含量

3.1实验部分

3.1.1仪器与试剂

3.1.2标准溶液、衍生化试剂和缓冲溶液的配制

3.1.3 柱前荧光衍生化反应

3.1.4 样品前处理

3.1.5 色谱条件

3.2 结果与讨论

3.2.1 样品前处理方法确定

3.2.2线性范围及最低检出限

3.2.3精密度和稳定性

3.3 本章小结

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文